PCR条带弥散，求大佬们应该怎么解决
dxy_81kfmah8
- Marker正常，目的条带是2500bp
- 图中从左到右分别是marker，和62-72退火温度的同一cDNA第一链模板
- 电压是220v，胶板长度大概为6cm，琼脂糖是1%
- 引物是加了酶切位点和15个保护碱基
3 个回答
且行且尽力
有帮助
可以看看模版是否降解，如果降解重新提取。
实验可以设置阴性对照和阳性对照，这样可看出是体系的问题，还是pcr条件的问题。
若阳性对照有目的条带则说明，引物，体系，条件没有太大问题，可能是模版含有某些抑制因素，镁离子和退火温度等可以进行相应的调整
huarenqiang5
有帮助
考虑：1、电泳槽中电泳缓冲液不净
2、电压不稳定
3、如果PCR的模板是经过酒精提取的质粒等相关DNA,则酒精没有除净
dxy_81kfmah8
那大佬，请问一般pcr的电压是多少呢？电流需不需要特别关注呢
土井挞克树
有帮助
有可能PCR体系中存在污染
或者退火时间过长或过短，延伸时间过短等。
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