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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
qRT-PCR结果如何用SPSS软件分析差异?
bamboopiggy
你只要把ct拿到按照deltadelta ct法的计算公式,得到基因的拷贝数,用excel也能算
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问
琼脂糖凝胶电泳,制备的胶块在紫外下就像是星星一样,特别亮,请问是什么原因呢?
dxy_gwrp7ndq
基因组污染了,很多RNA停留在孔中或者出孔很慢。
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问
PCR实验结果,无内标基因的扩增曲线是与采样操作、核酸提取有关吗?
府宅
内部无扩增但靶序列有扩增有可能是细胞本来就没有此内部基因,也有可能是本身模板就没提出来,然而在PCR过程中被污染,使得靶基因被扩增出来了。
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问
qpcr出现低置信区间等问题
bamboopiggy
1.你先确定你rna浓度够不够,逆转的效率如何?2.你操作过程中,所有东西都加全了?酶,引物,cDNA?3.你pcr程序是不是有问题?
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问
CT值在40以上的时候,是否可靠
Topmicro
一般不可靠,你做实验的时候要加入纯水做阴性对照,对结果的判定也要比较样品ct值和阴性对照的ct值。
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问
qPCR引物做預實驗融峰曲線是單峰但是ct值比較高,樣本cDNA-20放置半年,是不是應該考慮樣本的問題
bamboopiggy
对,cdna虽然很tough但是如果-20放半年还是会有降解的。ct值会变高
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问
为什么在做菌落PCR鉴定的时候阴性对照(模板为水)也能P出条带?
zj佐罗
可能存在污染的风险。建议重新做,排查是否是试剂问题还是水的问题。
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问
PCR样品太多时,同一样品的内参结果可以用在其他批次的样品中嘛?
zj佐罗
可以,但不提倡,如果你是老鸟,手法稳(指批次差异不大)可以用,如果菜鸟,建议每次做内参。
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问
用软件进行PCR引物设计时,怎么确保产物长度,怎么设计可以让引物在目的基因起始端
zj佐罗
直接在基因起始点选定引物,设定产物长度。
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问
关于PCR的相关知识提问
bamboopiggy
就是把你要克隆的片段两头各取15个碱基,加上酶切位点和三个保护碱基就好。
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问
家人们,做实验的时候,如何才能更好地避免引物被污染啊?
bamboopiggy
在配引物mix的时候,不要碰样品,把引物配好,都收起来只留mix,分装以后,再去碰样品
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问
q-PCR 有的组织样β-actin有双峰,有的组织又没有这是为什么鸭?求解答
dxy_gwrp7ndq
可能是beta-actin基因特异性不强,荧光定量PCR对引物的要求很高,就导致双峰
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问
“ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列”的原因是什么?
bamboopiggy
嘌呤或嘧啶成串会在GC富集区域引发错配。
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问
求载体构建的完整步骤和需要注意的事项哇
dxy_gwrp7ndq
载体构建的注意事项:1.连接反应是 DNA 重组过程中的关键步骤,其成败的重要参数之一就是温度,因此要控制好连接温度。2.进行黏末端连接时,会产生一定数量的载体自身环化分子,导致转化菌中过高的假阳性克隆背景。针对这一问题,常采用牛小肠碱性磷酸酶( CIP )去掉载体的5’﹣磷酸以抑制 DNA 片段的自身环化。
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问
为什么我600+bp的模板pcr出来1200bp的片段,还找不到多余片段来源?
bamboopiggy
你的模版是质粒还是genomic Dna?你换过引物,说明你也怕引物match不上,要不你试试缩短extension的时间?
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问
荧光定量PCR不制备重组质粒可以做吗?质粒可以
bamboopiggy
可以做啊,只要你有cdna片段就可以,或者是dna片段,也可以。
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问
求primer premier软件mac版!
dxy_gwrp7ndq
Primer Premier 5 下载链接: https://pan.baidu.com/s/1F5xSVr0NXIb54tAddZh28w 密码: goke
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问
多转录本如何设计引物
bamboopiggy
你先设计引物,然后去跟这些转录本比,最好所有转录本都可以有这段引物,就可以了。
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问
covid-19男女差异
天一湖医者
男性血浆中的ACE2浓度要高于女性。此外,该研究还发现,心力衰竭患者服用RAAS抑制剂,例如血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂(ARBs),他们的血液中没有更高浓度的ACE2。
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问
逆转录过程当中用的所有材料都是RNA级别的吗?EP管也要买特殊的吗?
迟C迟
是的,逆转录过程中的所有耗材都是经过处理的,最后逆转录成cDNA之后就可以用普通的EP管保存了。
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