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        qpcr出现低置信区间等问题

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        比你可爱

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        图片描述

        没有扩增出曲线,三个为一组样本(空白模型治疗),有一组昨天跑出扩增曲线了,也有趋势不知道今天为什么没有扩增曲线,以及这几个问题到底是什么

        求大神解答感谢,祝各位实验顺利!

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        2 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.你先确定你rna浓度够不够,逆转的效率如何?

        2.你操作过程中,所有东西都加全了?酶,引物,cDNA?

        3.你pcr程序是不是有问题?

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        参比染料设定不正确(MasterMix不加参比染料时,选NONE)。模板的浓度太高或者降解。荧光染料的降解。反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。

        反应条件不够优化:可适当降低退火温度或改为三步扩增法。

        反应体系中有PCR反应抑制物:一般是加入模板时所引入,应先把模板适度稀释,再加入反应体系中,减少抑制物的影响。

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