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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
这个是引物二聚体吗,cDNA,引物刚用过,pcr程序一样的,没问题,是什么操作还是其他原因导致的吗
bamboopiggy
不管是不是引物二聚体,这个数据不能用。你提的rna的质量如何?还有你反转的cDNA是第一次用么?如果是第一次用可能是cDNA质量不好。
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问
我的PCR内参有CT值,目的基因测不出CT值,请问是什么原因(有图)
Topmicro
你查到的是对的,重新设定一下阈值看看,就是将选取的荧光强度调高。
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问
miRNA加尾法进校qPCR的通用引物序列,请问哪位大佬能提供一下
秋秋欣欣
我用的U6引物序列是① U6snRNA F Primer 5‘ATTGGAACGATACAGAGAAGATT② U6snRNA R Primer 5’ GGAACGCTTCACGAATTTG
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问
可变剪接设计引物
秋秋欣欣
Gene,搜索选择相关的不同的isoform:点击其中一个isoform,复制全部序列到snapgene把四个isoform全部保存:点击第一个进去,进行编辑:首先在NCBI GENE里找到CDS(编码区),复制,ctrl+F到snapgene里,Features-add feature,命名为COS,其他三个isoform复制进来:这里的红色就代表外显子跳跃事件,我们将外显子跳跃事件的碱基复制,
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问
PCR 琼脂糖凝胶电泳 基因鼠鉴定
Eason老歌迷
胶上有很多划痕?有照片吗?感觉对实验结果影响不大,应该没事。
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问
荧光定量pcr标曲斜率过低,但是R2正常,是什么原因
whilt-shirt
有可能是qPCR的试剂问题,建议更换试剂后重试
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问
酿酒酵母酵母菌落pcr
Topmicro
和你是否诱变过关系不大,你可以拿一个没有诱变过的作对照,跑一下看看。
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问
qPCR点样时需要冰上操作吗?
balalaLy
如果你加样快数量少加完就跑的话可以不用冰,但是时间久的话毕竟里面有酶会失活影响结果,冰上不会有冷凝水
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问
投稿时,qPCR有数据不是很完美会被拒稿吗?
yanlai000
内参35???重新提RNA吧,完了测浓度
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问
目的条带先胶回收再双酶切还是双酶切再胶回收
balalaLy
先少量跑胶验证目的条带是否存在,如果条带单一,可以直接用剩下的做双酶切
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问
如何检测耗材上的DNA酶和RNA酶
illusio
一般用PCR检测,电泳基本检测不出来
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问
qPCR怎么会有这种扩增曲线?
秋秋欣欣
机器没问题的话,应该是环境有污染了,或者你的试剂有污染
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问
荧光定量PCR检测LC3-I/II
balalaLy
LC3B相当于LC3-11,一般是检测LC3B的rna水平
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问
PCR温度剃度如何快速摸索出来
illusio
一般情况下合理的退火温度约是从55℃到70℃。退火温度的设定一般要比引物的Tm低5℃。实验过程中设置退火温度时应比引物产品说明书标明的退火温度高出1℃~2℃最佳
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问
反转录试剂盒放于室温一天
bamboopiggy
不建议用了,但是你如果不舍得,可以先做个预实验试试,测一个关键基因,加一个内参基因。
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问
H9C2心肌细胞提RNA做QPCR内参选择
illusio
β-actin作为mRNA检测内参基因的范围比较广泛(除心肌,骨骼肌,平滑肌,特定肿瘤和组织之外);广泛用做western内参;GAPDH由于受代谢及影响因素较多,一般不用mRNA检测内参,广泛用做western内参。 有文献H9C2心肌细胞用以β‑tubulin为内参。可以多去看一下文献
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问
RT-PCR实验内参问题
illusio
可能第一遍的时候RNA降解严重,或者逆转录失败
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问
qPCR熔解曲线乱,有主峰,但有杂峰,80°C以下90°C以上都有,为什么
爱吃水稻的小呆瓜
建议定量引物先跑一趟琼脂糖电泳看一下条带,如果条带单一明亮,再去跑定量。如果还有很多峰,可能是引物二聚体,建议更换引物试试
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问
移液器加样问题,怎么样比较准确
bamboopiggy
其实都可以,就是你要给自己养成一个习惯,类似的操作,都要用类似的方法,如果你210 都用1ml的枪加,或者是105加两次,都可以,看你习惯。但是不建议换枪加
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问
用trizol提取小鼠组织rna,加入trizol匀浆之后trizol变成红褐色加入氯仿离心得到上清液是黄色的是怎么回事
dxy_6o4hdqje
有没有可能是钢珠质量不好,买到铁珠,泡在溶液里会生锈,释放三价铁离子,产生黄色溶液
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