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        PCR扩增有条带,连接转化菌p有条带,送测序是载体序列,怎么解决

        相关实验:利用 PCR 分析酵母菌落

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        dxy_hexi3anw


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        4 个回答

        user-title

        dxy_xextz7w2

        有帮助

        测出来是载体序列的话说明没有连接上,可能是引物特异性不好

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        loveliufudan

        有帮助

        可能存在以下几种情况和解决方法:

        1. 异源污染:在PCR反应或连接转化菌的过程中,可能存在来自其他样品或实验室环境的异源污染。这种情况下,建议进行严格的实验室操作和样品处理措施,以减少污染的可能性。

        2. 异位扩增:条带可能来自非预期的DNA片段扩增。在PCR反应中,确保使用正确的引物和目标DNA模板,并且优化反应条件(如温度和循环数)以确保特异性扩增。

        3. 载体重组或降解:在连接转化菌的过程中,可能发生了载体的重组或降解。这可能导致连接的DNA片段未能稳定地保持在载体上。建议仔细检查连接试剂和转化菌的处理步骤,并确保使用高质量的载体和连接酶。

        user-title

        sswei

        有帮助

        引物用量偏大,引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。

        循环的次数过多。适当增加模板的量,减少循环次数。

        user-title

        dxy_hexi3anwuser-title

        是扩增的时候加减还是菌p加减

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是测序中有载体污染,可以纯化后再测序

        user-title

        dxy_hexi3anwuser-title

        试过测切胶产物,还是不行

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