【求助】chip阴性对照pcr也有条带出现
丁香园论坛
10402
小女子近来开始做chip，结果pcr后input的条带很亮没问题，只是阴性对照（加的是同种属的normal IgG）也出现了条带，而且和目的抗体的差不多，后来怀疑是交联时间太长（20min）随减为5min，10min还整了个没加抗体的做对照，结果还是加IgG和没加抗体的对照都有条带出现，怎样才能阴性对照没条带，还有就是超声怎样才能避免气泡的产生呢，每次超声都有大量气泡，求高人指点。
实验中抗体1ul，agroseA/G 20ul，超声1s 40次，洗是低盐高盐各一次，TE两次，4°C摇10min
实验中抗体1ul，agroseA/G 20ul，超声1s 40次，洗是低盐高盐各一次，TE两次，4°C摇10min
抗体可以多加点，加到4ug。阴性对照有条带是正常的，属于背景，关键是相对于目的抗体条带很弱才行。建议你做一个阳性chip实验证实你的体系没问题以及抗体没问题然后确定是否你的chip实验结果可信。
waterbeijing wrote:
抗体可以多加点，加到4ug。阴性对照有条带是正常的，属于背景，关键是相对于目的抗体条带很弱才行。建议你做一个阳性chip实验证实你的体系没问题以及抗体没问题然后确定是否你的chip实验结果可信。
交联时间长怎么影响阴性结果不懂？不是只要是不被beads结合的话都在˙上清中扔掉了啊，最有可能就是没洗干净？求解答
最近一直出现此问题，纠结，不知解决了吗？
本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号：shixiongcoming
