pcr提取完的基因总突变，用了高保真酶也没用，有时候转化进大肠杆菌测序得到的基因序列彻底比对不上。

可能是其他基因也共用这个引物序列，你可以用测序结果匹配一下是不是其他相似基因的序列

不一定是发生了突变，排查下引物

设计的引物是否正确合理,很多是引物设计不合理出现的突变.

你要不要看看是不你p的这个基因在基因组里和它有相似度很高的基因，我之前就遇到过，p了好几次，每次都有几个点突变，后来发现，基因组里有一个相似度很高的基因，一直P的都是另外一个基因。

先确认模板的序列是否正确，然后采用高保真酶进行pcr

1.首先确认是不是刚PCR结束后提取的样品测物结果是不是就不对了，如果换了高保真酶依然不对，那建议换一家测序公司看看。

2.如果一开始测物结果是对的，保存一段时间后突变了，就更换缓冲液，用elution buffer 或者用干粉状态保存

如果你在PCR扩增和测序过程中发现基因序列无法完全比对上，有几个可能的原因：

1. PCR错误：即使使用了高保真酶，PCR反应中仍然可能发生错误。这些错误可能是由于引物的非特异性结合、模板DNA的异质性或其他PCR条件不理想等原因引起的。这些错误会导致扩增产物中的突变。

2. 突变率过高：某些基因可能具有高突变率，这意味着在复制过程中会发生更多的突变。这些突变可能会导致在PCR扩增和测序过程中出现不匹配的情况。

3. 测序错误：测序过程中也可能出现错误。测序仪器的精确性、碱基质量和测序反应的条件都可能对测序结果产生影响。

4. 重组事件：在某些情况下，PCR扩增的基因可能会发生重组事件，导致不一致的序列结果。这可能发生在DNA片段重组或杂交事件中。