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        PCR扩增后期条带很淡

        相关实验:聚合酶链式反应

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        Elaine_npxa

        在进行PCR扩增时,前期所跑出来的条带单一且很亮,但跑着跑着就会开始亮度减弱亦或是跑不出来、条带很多,请问这是什么原因呢?后期跑不出来的时候已经将模板更换过也是跑不出来。

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        最可能的原因可能是模板DNA降解或消失。这可能是由于DNA质量不佳、PCR反应体系中存在抑制因素、PCR反应过程中的外界环境因素(例如温度、时间等)等因素导致的。建议您对实验过程中的样品和反应条件进行全面的评估,包括DNA质量、PCR反应体系的组成和浓度、PCR反应的温度和时间等方面。此外,如果样品存在污染,可能也会影响PCR反应的效果,因此也要注意样品的纯度和质量。最好对PCR产物进行测序确认,以了解扩增产物的准确性和特异性。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是引物不合适的原因,建议更换特异性高的引物。新引物可以多设几个梯度(4~5个)扩增,可以得到好一些的结果。

        user-title

        sswei

        有帮助

        1:模板DNA不行,纯度不够或者量太少,建议做下OD260/OD280分析,看看纯度与浓度。

        2:设计的引物对你的其它样品的特异性不够,导致条带的模糊

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