凝胶迁移实验（EMSA）

凝胶迁移实验（EMSA）

 

▼服务简介

 

    植物按照中心法则完成遗传信息的转录和翻译。不同基因型的个体通过将DNA转录为RNA, RNA进一步翻译为蛋白质, 从而表现出不同的表型。其中, 起始转录步骤的成功与否影响着后续步骤(如RNA的可变剪接以及翻译)的进行。因此,转录在植物生命过程中发挥至关重要的作用。此外, 转录还能调控基因的组织特异性表达以及基因表达对特定信号的响应, 进而影响器官的分化以及植物对环境的适应性。转录过程一直是生命科学研究中的热点问题。近年来, 大量研究从转录调控的角度解析了植物对热、冷和干旱等胁迫信号以及对外源光信号的响应机制。在转录调控机制的解析过程中, 凝胶阻滞迁移率检测(electrophoresis mobility shift assay, EMSA)是行之有效的技术手段。

 

▼应用场景

    

          EMSA是检测转录因子能否直接结合DNA的常用技术。

 

▼实验原理

 

    EMSA是一种研究转录因子与DNA结合的实验技术, 可用于定性和定量分析。通常将纯化的蛋白和同位素或生物素标记的DNA探针共同孵育, 然后在非变性聚丙烯凝胶上电泳, 从而将DNA-转录因子复合物与不结合的探针分离。由于分子量变大, DNA-转录因子复合物比不结合的探针迁移速度慢, 因此转录因子结合标记探针后使自由探针含量减少。研究者通常按照上述2个标准判断转录因子是否结合DNA。

 

▼服务内容

 

    

 

▼我们的优势

 

1. 表达蛋白时有独家改造的适合不同蛋白表达的标签载体，确保表达出可溶性蛋白；

2. 原核表达对培养基，温度，ph，时间，分子伴侣等进行优化组合，确保可溶性蛋白产量；

3. 添加各种裂解液和蛋白酶抑制剂的超声破碎缓冲液，确保蛋白产量；

4. 独特的超滤缓冲液配方，保护蛋白且不影响蛋白和DNA结合；

5. Thermo原装试剂标记探针，保证标记效率；

6. 独家EMSA结合缓冲液，确保弱互作能够正常结合；

7. 独家封闭液和洗涤液，降低实验背景。