凝胶电泳迁移率| 凝胶迁移实验| 凝胶迁移电泳分析（EMSA

服务介绍    

凝胶迁移或电泳迁移率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用，是转录因子研究的经典方法。

验证型EMSA

⽤于验证探针是否含有可与蛋⽩质结合的位点。将结合位点突变，以突变探针为对照，野⽣型探针出现迁移条带，⽽突变探针未出现迁移条带，则说明该探针含有可与蛋⽩质结合的位点。

竞争型EMSA

探针序列不变，不含修饰基团的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性地与蛋⽩结合，冷探针不显影出迁移条带。以冷探针为对照，标记探针出现迁移条带，⽽冷探针迁移条带减弱或消失，则排除了假阳性⼲扰，增加实验结果准确性。

超迁移EMSA

使⽤⽬标蛋⽩的特异性抗体，蛋⽩-探针复合物被抗体识别并结合，该三聚复合物在凝胶电泳中，迁移速率再次增⼤，出现在蛋⽩-探针复合物的上⽅的超迁移条带，验证了探针与⽬的蛋⽩的特异性结合。

服务优势

• 直接测定蛋白质与核酸的相互作用，提供定性和定量信息。

• 可用于研究多种类型的相互作用，如特异性结合、非特异性结合、序列特异性等。

• 技术简单，实验操作相对容易。

• 可以使用不同的标记方法和检测技术进行适应不同实验需求。

服务流程 

       接收订单及样品----实验设计----合成探针---- EMSA电泳凝胶配置----EMSA反应----电泳检测----显色反应----结果交付
 

客户提供

• 需提取核蛋白的细胞＞10⁷，动物组织不少于400 mg，植物组织不少于2 g，建议客户在金开瑞表达重组蛋白；

• 探针序列；

• 如使用结合蛋白特异性抗体，抗体50 μL以上，浓度大于0.5 mg/mL。

服务说明     

特别说明：

▶ EMSA亦可⽤于研究RNA结合蛋⽩和其相关RNA序列的相互作⽤ 

▶ 如需要做超迁移，需提供IP级别的抗体

▶ EMSA与酵⺟单杂交，可共同验证同⼀个问题

案例展示

相关技术服务

● 修饰/标记引物           ● 双荧光素酶报告系统          ● 酵母单杂交

● CO-IP                       ● RNA pull-down                ● RIP-qPCR

● DNA pull-down       ● ChIP-qPCR                        ● 酵母单杂交

● CUT&Tag

相关资源

1、EMSA的实验步骤

    ▶ 准备蛋白质和核酸：获得目标蛋白质和相应的DNA或RNA探针。蛋白质可以是纯化的重组蛋白质或细胞提取物。

    ▶ 准备核酸标记：对DNA或RNA探针进行标记，常见的标记方式包括放射性标记（例如32P或35S）或非放射性标记（例如荧光标记或生物素标记）。

    ▶ 反应混合：将标记的核酸探针与蛋白质样品混合，添加反应缓冲液，包括缓冲盐、非特异性竞争物和非特异性DNA或RNA。

    ▶ 反应进行：将反应混合物在适当的温度和时间下孵育，以促使蛋白质与核酸结合形成复合物。

    ▶ 电泳：将反应混合物加载到PAM凝胶电泳槽中，进行电泳分离。在非变性条件下进行电泳可以保持蛋白质与核酸的结合。

    ▶ 凝胶固定和成像：电泳结束后，凝胶固定并进行成像，例如通过放射线照射敏感的凝胶后，通过放射自显影或荧光成像检测标记的核酸探针。

    ▶ 结果分析：分析凝胶图像，观察是否有蛋白质-核酸复合物的形成。蛋白质-核酸结合会导致迁移速度的减慢或带移动位置的改变。

2、EMSA的应用

    EMSA（Electrophoretic Mobility Shift Assay）是一种常用的实验技术，用于研究蛋白质与核酸（DNA或RNA）之间的相互作用。它在许多研究领域中得到广泛应用，包括但不限于以下几个方面：

    ● 转录因子研究：EMSA可用于研究转录因子与DNA的结合。通过分析转录因子与特定基因启动子或调控元件的结合能力，可以揭示基因调控网络和转录调控机制。

    ● RNA结合蛋白研究：EMSA可用于研究RNA结合蛋白（RNA-binding proteins，RBPs）与RNA的相互作用。通过探究RBPs与目标RNA序列的结合，可以了解RBPs在转录后调控、RNA稳定性和翻译调控等过程中的功能。

    ● DNA修复和损伤识别：EMSA可用于研究DNA修复酶和损伤识别蛋白与DNA损伤位点的结合。通过分析这些相互作用，可以深入了解DNA修复机制和DNA损伤应答通路。

    ● 药物筛选和药物靶点研究：EMSA可用于筛选和评估潜在药物分子与特定DNA或RNA序列的结合能力。通过检测药物与靶点的相互作用，可以评估药物的亲和力和选择性，为药物开发和靶向治疗提供重要信息。

    ● 基因调控网络研究：EMSA可用于研究基因调控网络中的转录因子与调控元件之间的相互作用。通过分析转录因子与特定启动子或增强子序列的结合，可以揭示基因调控网络的结构和功能，以及转录因子在调控基因表达中的作用。

    ● 疾病相关基因的功能研究：EMSA可用于研究与疾病相关的基因的功能调控。通过分析疾病相关基因的启动子、增强子或调控元件与转录因子的结合，可以了解这些基因的调控机制和与疾病相关的功能变化。

3、蛋白质与核酸之间的相互作用有哪些，常用哪些技术去检测？

    ▶ 蛋白质与核酸之间的相互作用包括转录因子与DNA的结合、RNA结合蛋白与RNA的结合以及其他蛋白质与DNA或RNA的相互作用等。常用的技术用于检测这些相互作用的方法包括：

    ▶ 电泳迁移实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA）：通过电泳迁移分析蛋白质与DNA或RNA结合的迁移差异。该方法基于蛋白质与核酸结合后形成复合物的迁移速度不同，可定性分析相互作用的存在与否。

    ▶ 共沉淀实验（Co-precipitation Assay）：利用特定的亲和剂或抗体富集与目标蛋白质相互作用的DNA或RNA分子。该方法可用于定性和定量分析相互作用的强度和特异性。

    ▶ 免疫共沉淀实验（Immunoprecipitation, IP）：利用特定抗体选择性地富集目标蛋白质及其结合的核酸。该方法通过蛋白质-抗体互作用实现蛋白质与核酸的联结，可用于鉴定和定量分析相互作用的蛋白质和核酸分子。

    ▶ 酵母双杂交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）：通过利用酵母细胞内的转录激活和检测系统，研究蛋白质与蛋白质之间的相互作用。该方法可用于筛选和鉴定蛋白质-蛋白质相互作用的交互配对。

    ▶ 表面等离子共振（Surface Plasmon Resonance, SPR）：通过监测蛋白质与核酸相互作用引起的光信号变化，实时测量它们的结合动力学和亲和力。该技术可提供定量的结合强度、关联和解离速率等信息。

    ▶ RNA pull down：利用特定的RNA分子富集与目标RNA结合的蛋白质。该方法可用于鉴定与RNA相互作用的蛋白质，从而揭示RNA的功能和调控机制。

    ▶ DNA pull down：利用特定的DNA序列富集与目标DNA结合的蛋白质。该方法可用于研究与DNA结合的蛋白质，如转录因子和其他DNA结合蛋白质。

 

武汉金开瑞生物工程有限公司是一家专业致力于为全球制药企业、诊断试剂企业、科研试剂研发企业、高校和科研院所以及大型医院提供蛋白及相关研究技术服务的高新技术企业。金开瑞极其注重平台技术提升，现已有多项自主知识产权和软件著作权专利，并已通过ISO9001质量管理体系认证，2018获批“千企万人”支持计划。公司以“细胞外囊泡”研究中心、基础生物医学实验中心、蛋白抗体中心和分子生物学中心为依托，提供核酸和蛋白的整体研究方案，与众多科研单位携手开展了大量的探索项目。截止到目前，已支持客户发表科研论文达1000+篇，累计影响因子6000+。