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        感受态细胞制备老是出问题?

        相关实验:制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法实验(制备超级感受态细胞)

        user-title

        Rena1122

        新手小白在学着做,因为实验室没有人会做这个所以过来寻求一个指导🥲

        青霉素浓度是100mg/ml,配置的时候最开始与培养液的浓度是100ml液体培养基:100ul青霉素,后来发现长得实在是太满了浓度往上提就变成了下图

        质粒浓度是0.1ng/ml,每个培养基内加入2.5ul

        空白对照是10ul感受态不加质粒

        图片描述

        25ul 感受态+2.5ul的质粒

        图片描述

        请问一下这个状态是不是感受态没有长出来?

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        4 个回答

        user-title

        gyzyxy

        有帮助

        刚开始做的话还是建议蓝白斑+抗性筛选。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        从这个图片上来看感受态还没有长出来。

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以考虑增加质粒的浓度,质粒还是有点少

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        感受态细胞制备需要注意许多因素,例如细胞的健康状况、感受态转化的条件和细胞培养条件等。下面是一些可能会影响感受态细胞制备的常见问题和解决方法:

        细胞的健康状况:如果细胞的健康状况不好,就可能会影响感受态转化的效率。因此,应该确保细胞在转染前生长得健康并且没有感染。

        质粒的浓度和纯度:质粒的浓度和纯度对感受态转化的效率有很大的影响。一般来说,质粒的浓度应该在0.1-1ug/ul之间,纯度应该高于90%。如果质粒的浓度或纯度不够,可以尝试提高浓度或者纯化质粒。

        转染条件:感受态转化的条件包括转染剂的种类和浓度、质粒DNA的量、转染时间和转染温度等。这些条件需要根据不同细胞类型和质粒来进行优化。如果感受态转化效率不高,可以尝试改变转染条件。

        细胞培养条件:感受态转化后的细胞需要在适当的培养条件下维持其感受态。这些条件包括培养基的种类和配方、CO2浓度、培养温度和细胞密度等。如果感受态细胞长得不好,可以尝试优化细胞培养条件。

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