热蛋白组学实验，在用液氮冻融裂解hepG2细胞后，BCA定量细胞蛋白浓度过低是什么原因呢？

主要考虑：1.可能细胞状态不好；2.蛋白与蛋白间性质差异大；3.BCA反应非线性，测定时可能出现偏差，要精度准确，做标准曲线时的点设置多些；4.试剂BCA，一般最低检测限5ug/ml，

灵敏度要达到1ug/ml，必须采取加强法测定，比如样品多加几倍。

液氮冻融裂解细胞的效果通常比较好，而且使用含1% EDTA和蛋白酶抑制剂的PBS做缓冲液也是正确的。因此，可能的原因有以下几点：

细胞数目不足：用300万个HepG2细胞来做热蛋白组学实验的话，可能会偏少。如果可以，您可以尝试增加细胞数目来裂解获得更多的蛋白质。

冻融次数过多：尽管液氮冻融裂解通常是高效的方法，但三次冻融循环可能会导致蛋白质的降解或者流失，因此可能会降低蛋白浓度。

蛋白质含量的检测方法不准确：BCA方法是一种比较敏感的蛋白质定量方法，但是在一些情况下可能会出现误差。您可以尝试使用其他的蛋白质定量方法来验证您的结果，比如Bradford方法。

总之，为了确保获得足够的蛋白质，您可以尝试增加细胞数目或者尝试使用其他的细胞裂解方法。

裂解过程中破坏的太多了，改进一下提取方法，要不然需要的细胞太多了。