快速单片段DNA组装预混液，阿拉丁

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（下篇）

，扩增目标片段 扩增片段与线性化载体、组装预混酶混合反应 转化感受态细胞 · Step 1 · 如果载体上正好有合适插入目标片段的酶切位点，酶切载体使之线性化。为了降低单酶切载体不完全的几率，减少载体自连和提高筛选成功率，强烈建议双酶切——后面一个切点只要距离第一个切点 5 个碱基以上就行（主要是给两个酶留出结合空间）。如果没有合适的酶切位点，根据选定插入位点设计引物，用反向 PCR 来获得线性化载体。在多片段组装克隆的世界里，凡是酶切搞不定的，统统 PCR 引物设计搞定。简单粗暴有效。 ·

DNA序列和大规模DNA测序策略的探讨（图）

，然后组装便可获得未知片段的碱基序列。 三、单分子测序法（single-molecule seguencing） 单分子测序法是美国Los Alames国家实验室（LANL）)发展的一种通过检测标记在单个分子上的荧光进行DNA快速测序的方法。模板DNA分子首先通过酶法修饰或合成，使不同的荧光素标记不同的碱基，然后，用两个激光束（或称激光镊子lasertweezer）夹住标记的DN A分子，将其置于液流系统，从被固定的核苷酸上游端开始用外切酶逐一切下被标记的核苷酸，通过单分子荧光探测器检测液流中

四步致胜奇招 高效克隆你值得拥有（上篇）

《分子克隆》 虽然伟大的、人手必备的“分子生物学宝典”——《分子克隆》——里涵盖了分子生物学领域几乎各种基础技术（新中文版三册足足 3.5 公斤，知识就这么沉重），但实际咱们平时说的分子克隆技术主要是指将含有“目的基因的 DNA 片段”以“体外重组技术”插入某种 DNA 载体上，得到一个重组 DNA 分子。分子克隆技术现在早已算不上是“超酷”的前沿技术，只能算分子生物学基础入门技术，但它依然是整个分子生物学基础的核心之一，熟练掌握分子克隆技术之关键、又快又准地完成分子克隆依然是实验必需的看家