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        pet28a为载体的质粒转化后在kana平板上长出单克隆,挑菌摇菌长不出来怎么回事

        相关实验:质粒的制备

        user-title

        玉子烧啊啊啊啊

        以pet28a为载体构建了质粒转化后在kana平板上长出了单克隆,但是挑单克隆摇菌(kana浓度50ug/ml)长不出来是怎么回事呀,每个单克隆确定挑中了,摇菌300rpm,37℃,12个小时,培养基都是澄清的

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        4 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        你用多大体积摇的?一般先用3ml摇过夜吧?

        确定没有放错kana?还有你转速有点太快了,降到250,摇过夜试试

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以增加一下菌的含量,考虑菌量偏小。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        可能是平板有问题,也就是说平板上长的单克隆不是需要的抗性;可以用新鲜平板划线,如果能长,再从新平板上挑单克隆摇菌;如果不长,说明原来平板上的单克隆不对。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这种情况可能是由以下几个方面导致的:

        质粒有突变:有时候,质粒在构建过程中会产生不同程度的突变,从而影响到细菌对抗生素的敏感性。因此,您可以考虑对质粒进行测序,看是否存在突变。

        抗性基因表达不足:可能是您的宿主菌对抗生素的敏感性很高,也可能是您构建的质粒抗性基因的表达水平不够高。您可以尝试使用更高浓度的抗生素来筛选,或者使用更高效的抗性基因。

        培养条件不够适宜:摇菌的时间、温度、摇动速度等条件都可能影响到细菌的生长和繁殖。您可以尝试在不同的条件下摇菌,看是否会对结果产生影响。

        建议您可以从这几个方面入手进行优化,并在优化过程中不断尝试和调整。此外,如果实验条件允许,可以考虑使用其它筛选方法,例如PCR筛选等。

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