凝胶电泳条带随时间消失或变淡

因为EB往负极移动，电泳时间越久，条带处亮度越弱。PCR条带出，没有EB了，背景会变暗，相对高背景处，条带基本看不清晰，甚至看不到。

建议：电泳液高于胶面1毫米左右，不要太多，不要多天使用同一电泳缓冲液，醋酸会挥发。

酶切不完全可能出现挨着很紧的两条带。隔很远可能在回收过程中发生的降解，以及胶回收时，没有复性完全，部分任然一单链存在

在跑凝胶电泳时出现条带消失或变化的情况，通常是由于蛋白质发生了变化引起的。这种变化可能是由于蛋白质的氧化、过氧化或温度变化引起的。

对于凝胶回收前只有一条带，而回收后出现了一条新的非特异性条带，这可能是由于凝胶回收过程中所使用的溶剂或其他因素导致的。例如，如果回收过程中使用的溶剂有较高的pH值，则可能会引起蛋白质的结构变化，从而导致新的条带出现。

在这种情况下，我建议你考虑使用其他溶剂或方法来进行凝胶回收，看看是否能够避免这种问题的发生。此外，你还可以考虑使用其他方法，例如超声波等，来帮助溶解凝胶中的蛋白质，以便进行分析。

考虑你的电流和电压是否有问题，建议用90V的电压，把电流提高些试试看。