酶切拖带和切不开的现象
dxy_xe8i7gd4
求助，我在用PCR的扩增液做单酶切，之前做的好好的没什么问题，最近发现按照之前完全相同的流程酶切切不开或者切开有拖带的现象。我开封了新的引物，新的内切酶，延长了酶切时间，减小了点样时扩增液的点样量，重新提了DNA，将buffer（10x）的含量提升到了酶切体系的1/10，酶切时间从2小时、4小时到过夜都有尝试过但还是没有达到之前的水平。
请问大佬还有其他什么原因吗？万分感谢！
4 个回答
路人假5JB3
有帮助
首先一定要确定是否是咱们所用试剂的原因
其次确定咱们的目的基因没有问题，建议你测个序
bamboopiggy
有帮助
感觉还是你的酶有问题，虽然是新开的，但是2 4 overnigh都不好的话，感觉还是酶坏了
dxy_xe8i7gd4
好的，我看看换一下品牌的酶或者问问销售，谢谢
balalaLy
有帮助
有没有可能是buffer的效率降低了？buffer的量以及反复冻融也会有影响的哦
dxy_xe8i7gd4
每次从冰箱拿出来buffer为了加快溶解，我都用手捂一会儿，不知道这个有没有影响？
土井挞克树
有帮助
是否是你目的基因的问题，不是单一的酶切位点。
dxy_xe8i7gd4
目的基因应该没问题，原来都可以切的开，位点也都是之前找的
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