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        为什么产生了非特异性条带?

        相关实验:痘苗 DNA 检测实验

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        Eason老歌迷

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        1.可能你的引物不特异,所以产生了非特异条带。2.尝试提高一下 annealing temperature,会降低非特异条带的产生。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.抗体浓度过高;降低一抗、二抗的浓度,可以分梯度进行。

        2.一抗的特异性不足;使用单克隆抗体,单克隆位点的抗原表位是唯一的,多克隆位点的表位不唯一。

        3.二抗的非特异性结合,不加一抗,其他操作不变,即可检测出二抗的非特异性的条带是否来自二抗的非特异性结合;此时需要重新选择二抗。

        4.样品蛋白质上样量过大;降低上样量,可以分梯度进行。

        user-title

        未来9

        有帮助

        最常见的2个原因如下:

        1 引物设计不合理,通常是特异性不佳,导致PCR时在退火阶段,引物结合到多个基因位点上了。

        2 还是引物,如果非特异性扩增的条带分子量非常小,有可能是引物二聚体。产生的原因是引物过量了,或者引物自身形成了配对,结果在PCR过程中互相结合、扩增。

        还有几种可能的原因:

        1 聚合酶的量太多

        2 扩增的循环次数太多

        3 模板被污染,PCR体系被污染,例如引入了其他DNA成为模板

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