• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        试剂盒提取质粒后电泳一片弥散,无目的条带,这是哪个步骤出问题了?

        相关实验:痘苗 DNA 检测实验

        user-title

        天一湖医者

        目的片段连pET32a ,16度过夜,酶连体系为目的片段5μl,载体3μl,T4连接酶1μl,1undefinedBuffer1μl.转化后涂LB-AMP平板,过夜平板长有菌落,但菌落不大,都很孤立,挑取菌落于LB-AMP液体摇菌过夜,试剂盒提取质粒后电泳一片弥散,无目的条带,这是哪个步骤出问题了?

        wx-share
        分享

        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        感觉是你没有连接成功,平板上长的都是杂菌。你下次做个不加连接产物的阴性对照看看,如果和阴性对照长的差不多,那就是连接产物要么没有连接成功,要么没有转到大肠杆菌里去。

        user-title

        Guoood

        有帮助

        挑单克隆提质粒后可先进行菌落PCR,菌落Pcr阳性的克隆进一步进行双酶切鉴定,如果没有切除目的条带,大概率是空载,需要重新连接转化了。

        user-title

        未来9

        有帮助

        如果是普通电泳,RNA污染量不大的话可能看不到,如果比较大的话会成弥散的条带,因为在电泳过程中会降解,如果提取的RNA质量较好,电泳过程没有降解掉的话,可能会有一条比较清晰的条带在目的条带的下方,因为RNA电泳比DNA跑的快正常操作实验中提取质粒应该出现2条条带,由于空间结构的差异,从上至下第一条为较为松散的DNA环状结构,第二条是环状DNA超螺旋结构,有时往往会存在第三条带(出现在松散环状质粒DNA条带上方),即为DNA开环结构(由于质粒提取过程中闭合环状DNA遭到破坏,环状结构打开变为直链DNA)。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序