实验问答21,848,634 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问构建的融合蛋白，为什么看不到红色荧光！

bamboopiggy

你质粒构建的时候,去掉你那个基因的stop code了吗？另外注意rfp的读码框别移位了。

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问这是形成引物二聚体了吗？但是为什么产物也很多

bamboopiggy

看位置是引物二聚体，只要有你的目的条带，你不要管这个二聚体就好。至于产物也多的原因，是因为你pcr反应的底物和酶，包括引物本来就是过量的，所以够合成你的目的条带。

3 回答450 围观

问求大佬给点思路/::<

迟C迟

把酶量减少，酶切时间减少，再检查一下你的载体序列，是不是还有这两个酶识别的位置。

3 回答518 围观

问请问是所有的DNA染料都需要避光4度保存吗？

迟C迟

尽量避光保存。现在商业化的DNA染料还是比较稳定的，不必过分担心。

3 回答637 围观

问请问DNAmarker长时间放在室温下，会导致跑不出来条带或条带弥散不清晰吗

迟C迟

一般不会，我们实验室都是常温放置的。如果出现条带弥散的情况，可能考虑是不是电泳缓冲液需要重新配置了。

3 回答1860 围观

问请问离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱与离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中的CB2吸附柱有什么不同吗

dxywode

离心柱型质粒小提试剂盒中的CP3吸附柱采用碱裂解法裂解细胞并提取质粒。其基于离心纯化柱能够在高盐状态下特异性地与溶液中的DNA 结合，而在低盐状态下进行DNA 洗脱的特性，实现质粒DNA 的快速纯化。使用本试剂盒提取的质粒DNA 可适用于各种后续试验操作，如：酶切，PCR、测序、连接、转化、文库筛选、体外翻译、转染部分细胞等。离心柱型通用型DNA纯化回收试剂盒中本试剂盒采用特殊的离心吸附材料，既能

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问SSR分子标记如何定位基因

迟C迟

简单重复序(SSR)也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1一6 bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA) n和(TG) n。主要通过微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，因而能够用PCR的方法扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率。在真核生物中，存在许多2-5bp简单重复序列，称

3 回答9964 围观

问构建重组载体转化大肠后测序，序列总有突变，可以从那些方面分析原因？

bamboopiggy

首先把你的模版拿去测序，我遇到过因为模版有问题，结果怎么改条件都不行。2.如果实在不行，设计引物，把突变的地方再给它突变回来。我当时就是发现模版也有mutation，只能自己给它纠正回来

3 回答812 围观

问DNA在什么条件下保存？

whilt-shirt

一般是-80℃保存，但是短期内用完的话可以放4℃

4 回答5749 围观

问EMSA实验为什么shift有两条带

whilt-shirt

1）曝光或者成像时间过长。2）封闭时间不足或者效率不高。3）洗涤效果不佳。4）实验过程中膜没有一直处于湿润状态。

3 回答1623 围观

问细胞分选单克隆之后一般多少天能长起来呀？

丁香粉猪猪

干细胞填充后，通常需要3-4周开始增生，3个月左右达到最佳效果。

3 回答857 围观

问直接提取DNA的电泳图发现有两条带，且与目标大小不一致

猪美美的小蘑菇

你的marker是多大的，如果marker使用没有错误的话，下面两条带看着像引物二聚体

2 回答987 围观

问AAV病毒纯化方法及感染细胞的实验方法，及相关注意问题？

丁香实验

AAV的纯化1）向病毒浓缩液中添加固体 CsCl 直到密度为1.41 g/ml（折射率为1.372）；2）将样品加入到超速离心管中，用预先配好的 1.41 g/ml CsCl 溶液将离心管剩余空间填满；3）在 175,000 g 下离心24 小时，以形成密度梯度。按顺序分步收集不同密度的样品，取样进行滴度测定。收集富集有AAV 颗粒的组分；4）重复上述过程一次。5）将病毒装入100 k

1 回答1143 围观

问病毒做TCID50确定滴度的问题

丁香实验

如果有cpe而没有荧光，应该修饰区域的丢失。我之前遇到过这种情况。

1 回答988 围观

问为什么病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解？

丁香实验

自己做个结论，是资料上使用的离心机和我使用的离心机不一样，我使用的相同转速，离心力要大于资料上的，在做了离心力换算，调整转速后，问题解决了。所以，以后看见资料上写转速的，一定要小心了，很可能就是一大坑。

1 回答1933 围观

问如何提高DNA提取纯度？

丁香实验

手工可以用吸附柱，全自动用磁珠的比较多。一般来说柱提法要比磁珠法提取的纯度要高，楼主还是换用柱提法的试剂盒吧，QIAGEN，天根，百代BIOG都有柱提法的试剂盒。

1 回答1323 围观

问DNA琼脂糖凝胶电泳关于上样的问题

mpark

For DNA with size less than 150 bp, try to run native PAGE, DNA over 200 bp, try to run 2% agarose gel (60V for 30 minutes). If you want to run 4% agarose, try to use low melting temperature agarose i

4 回答2462 围观

问咨询一下关于质粒的问题

realtimes

OD测定没有电泳准，电泳可见即所得，OD有不一定有质粒

3 回答414 围观

问【求助】ChIP超声条件摸索

丁香实验

还有，一般超声片段范围在200_1000比较好，其实200_2000也是可以接受的，只要能保证70%以上在这个范围，就可以了！

2 回答1558 围观

问染色体免疫共沉淀实验求助，那个proteinA/G是怎么回事？

丁香实验

别买磁珠需要相应的仪器来做磁珠肯定方便些的还有就是珠子不容易吸走背景好点噪音小不过细心点用普通的beads 离心也就可以了

2 回答563 围观

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