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质粒构建
Eason老歌迷
既然已经换引物了,说明不是引物的事,还是质粒啊,有没有一种可能,发生了自连?
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问
紧急求助
天一湖医者
基因和自杀质粒连接不上,一般是因为限制酶的识别位点大多是反向对称的,如果只用用同种酶切,所得片段的2端序列相同,在连接时,是随机连接,不仅会出现反向连接,而且会出现片段串联。
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问
细胞技术与形态学板块
balalaLy
伊红很容易染,也很便宜,很可能是你用的伊红有问题,直接换吧
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问
有没有能够在细胞内产生环状RNA的质粒?
Eason老歌迷
并没有发现。环状RNA由特殊的选择性剪切产生,大量存在于真核细胞的细胞质中,具有一定的组织、时序和疾病特异性。
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问
lamp2b的CDS哪里找 NCBI没有
迟C迟
文章的补充材料一般会提供基因序列,实在没有,可以联系作者提供。
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问
寻找某基因-170到90序列时第一bp是CDS区起始密码atg中的A么?
bamboopiggy
启动子(promoter):与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。转录起始点(TSS):转录时,mRNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基,通常为一个嘌呤。
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问
想做双酶切,出来的条带很浅,请问质粒浓度达到多少酶切的效果比较好?
天一湖医者
质粒浓度一般以μg/ml来计算,一般双酶切使用质粒的量为20μl使用1μg左右质粒。
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问
【求助贴】小鼠APP/PS1基因型鉴定
bamboopiggy
胎鼠和成年鼠的基因鉴定方式是一样的,建议你加一个成年鼠的做阳性对照,看是不是pcr过程中出现问题了。
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问
请问大家有遇到过内参的CT值变化的情况吗
balalaLy
有时候酶降解了也会出现内参ct值变化从而导致结果出现偏差
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问
质粒表达和染色体表达有什么区别
dxy_gwrp7ndq
这是由于染色体DNA携带的基因所编码的产物,在细菌新陈代谢中是生存所必须者;而质粒携带的基因所编码的产物并非细菌的生存所必须者。因此质粒可以在细菌间传递与丢失
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问
蛋白表达不出来
bamboopiggy
先提一下质粒送测序,确定你的质粒还在
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问
目的基因ct和外参ct
天一湖医者
可以用,不同基因之间表达量差异很大,可达上千甚至上万倍之差,所以CT值差10以内属正常现象。
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问
大肠杆菌XL1BLUE转化
天一湖医者
建议重新配置LB培养液。 确保菌种是新鲜的,如果过于老旧,建议重新涂盘(抗生素选择盘),挑克隆。最后实在不行,可以适当降低培养液中抗生素的浓度
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问
将含有环状RNA序列的连接产物转化后挑选数个单克隆摇菌提质粒,双切鉴定有目的条带,这些阳性质粒之间会有差别吗?
迟C迟
阳性克隆只是含有抗生素那段序列,成不成环不能保证,还需要再在阳性克隆里面挑选你要的。
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问
怎么判断感受态细胞是否好用,每次做转化都要两天才能长出来,是不是感受态的问题,质粒是18T载体,超级好连接的那种?
迟C迟
用酶切、PCR、测序 等方法验证长出来的菌落是否正确。可能是这一批感受态细胞活力不好,或者是培养箱温度不正常等等因素导致生长缓慢。
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问
CRISPR i如何设计靶向基因序列
府宅
可以在http://crispr.mit.edu/进行基因序列设计
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问
慢病毒转染细胞后筛选抗性基因的细胞需要怎么判断?
bamboopiggy
一般需要筛两周左右没有死细胞了,就可以了
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问
慢病毒转染细胞的时间多长?
bamboopiggy
最少48小时,我一般感染72h,甚至更长时间,看细胞的密度
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问
慢病毒转染细胞过程浓度多少?
秋秋欣欣
刚开始可以用96孔板或者24孔板做个浓度低度,设置不同MOI值的感染组,通常设立1,2,5,10,20,50,100的感染组别
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问
怎么找或者预测谷氨酸棒杆菌某氨基酸转运蛋白呢
府宅
可以通过上调氨基酸水平应用实时定量PCR证明其是否受存在转运蛋白。再利用绿色荧光蛋白与其构建融合蛋白,确定转运蛋白所在部位。
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