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问
长片段基因的扩增如何选择引物
z流沙z
引物设计没办法避开中间序列的错配或者突变,只能设计尽量好结合、相对特异的引物序列,使用高保真pcr酶可以降低突变概率
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问
引物设计的过长会有什么弊端?
sswei
引物过长会增加成本和引物的Tm 值,会影响PCR的特异性,引物越长,能够配对的概率减少,所以特异性增加或引物越长,包含的碱基越多,发生错配的概率就越高。
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问
链霉亲和素的表达纯化
土井挞克树
脱盐部分浓度太高会导致蛋白聚化,建议降低浓度
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问
噬菌体裂解酶没有空斑,但却有杀菌活性
土井挞克树
可能是细菌密度太低了,所以肉眼看不到空斑
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问
试剂盒提取细菌基因组,细菌离心离不下去
z流沙z
摇菌的时间和体积多一点,这样提出来就高了
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问
重复测量方差分析不同时间点样本数不同怎么办?
土井挞克树
那就只能做普通方差分析了,不可以做重复测量的方差分析
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问
TNF-a诱导caco-2细胞炎症模型问题,求解!
土井挞克树
通过细胞活力和检测细胞炎性代谢产物来确定造模的成功与否
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问
GST pulldown结果求分析
土井挞克树
可能是c蛋白与体系中的酶反应,降解了A蛋白
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问
构建Gfp-kferq质粒DNA有人做过吗 这个质粒能构建吗 质粒酶切一直没有条带质粒浓度一直很低
sswei
质粒酶切一直没有条带了,可能酶切位点发生了突变,也可能是酶失活了。
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问
急急急!!透射电镜取完材忘记放4度了,还能用吗?
sswei
温度太高镜筒里的碳氢化合物将易挥发影响真空度,同时也容易污染样品。
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问
荧光免疫层析湿法和干法差异大
loveliufudan
建议考虑以下措施来降低干法的非特异性:优化洗涤步骤:在洗涤缓冲液中加入一定量的表面活性剂,如Tween-20或NP-40,可以帮助清除非特异性结合的物质,降低背景荧光信号。加入防污染剂:将一定量的防污染剂(如BSA或casein)加入干法试剂中,可以降低试剂对背景的非特异性结合。优化反应条件:对于干法试剂,可以调整反应温度和反应时间来优化试剂的特异性和灵敏性。减少样品中非特异性结合:优化样品预处理
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问
关于单细胞测序数据分析
loveliufudan
对于单细胞测序数据,进行质控的步骤通常包括以下几个方面:去除低质量细胞:根据细胞的RNA质量、UMI数量等指标去除低质量细胞,以保证后续的分析质量。过滤低表达基因:根据不同数据集的表达水平和目标分析,设定表达阈值,过滤掉低表达的基因,以降低噪音的影响。校正批次效应:校正不同批次、实验或平台之间的表达量差异,以提高分析的可靠性。去除PCR扩增倍数过高的细胞:对于单细胞测序,由于PCR扩增,可能导致同
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问
单细胞样品制备无法避免细胞粘连
loveliufudan
如果难以彻底将细胞吹散,可以考虑采用其他细胞分离的方法,如机械剪切或酶消化等。此外,为了获得特定类型细胞的测序结果,可以采用细胞分选技术。以下是一些常用的细胞分选方法:流式细胞术:使用细胞表面标记分选目标细胞。磁性细胞分选法:使用与目标细胞表面标记结合的磁珠进行分选。微流控芯片:通过微流控芯片中的结构和流体调控,实现目标细胞的分选。免疫磁珠分选:使用特异性抗体结合目标细胞表面标记,然后使用磁珠分选
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问
【求助】希望能溶解SDS-PAGE凝胶(不需要保留蛋白)
土井挞克树
将无色透明的胶条从蒸馏水中取出,装入一准备好的1.5ml离心管中,用镊子夹碎(或在放入离心管之前用刀片切碎),我常用的是灭过菌的镊子夹碎。然后再在管里加入你所需要溶解蛋白的溶液,比如蒸馏水(生理盐水或PBS等)
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问
肾组织电镜
sswei
-80℃冷冻肾组织不能做电镜标本。
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问
请问想做癌症的差异蛋白分析-生信分析,现在有了数据,但怎么作图,求助
土井挞克树
1.进入网站首页http://www.cbioportal.org/,有很多不同肿瘤患者的数据集可以选择;也可以在红色方框内输入自己感兴趣的癌种,进行快速检索。2.选定数据集。点击Query By Gene,进入查找界面。3.选择1处Co-expression,获取基因FN1的共表达基因。4.筛选基因5.将符合条件的基因单独复制到子表格中,进行绘图
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问
我想构建一个蛋白的截断质粒,但是查了Ncbi数据库发现有三个蛋白亚型,是不管这三个还是用其中一个构建?
sswei
相同基因编码的不同蛋白质亚型或许发挥着多样的功能,所以需选择一个与研究相关的一个蛋白亚型进行构建。
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问
目的蛋白洗脱不下来或洗脱率低是什么原因导致的?
rh682
洗脱剂种类,体积选用不足,pH条件等不适当。
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问
突触电镜
sswei
可以借助相关的软件进行分折,如Nano Measurer等。
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问
求教:SKOV3和SKOV3/DDP形态差异在哪里?
土井挞克树
极化状态不同,一般DDP极化要强一些
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