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科研学霸天团，48小时有问必答

问cDNA 一扩跑电泳胶时留在点样空里跑不出来是什么情况呢？

huarenqiang5

可能是以下几点原因:1.条带中（目的DNA）掺有基因组DNA（因基因组DNA分子量很大，不能从上样孔中出来）。2.可能条带中（目的DNA）掺有蛋白质（因蛋白质与DNA一起，分子量很大，不能从上样孔中出来）。3.电压没加上，或你电泳缓冲液是用蒸馏水配制的，没有离子，不能导电，DNA没有泳动。

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问1.如遇组织标本，如何保证单细胞测序的细胞单一性？ 2.如何就获得的数据进行深度挖掘？ 3.如何平衡机体的个体差异与测序广泛性？

loveliufudan

1.针对组织标本进行单细胞测序时，保证细胞单一性的关键在于细胞的分离和捕获。通常采用酶消化、机械切割或磨碎等方法对组织样本进行分离和制备，然后通过流式细胞术、微流控芯片或微管阵列等技术将单个细胞捕获到反应管中进行测序。在这个过程中，需要注意以下几点：对组织样本进行消化或切割时，要尽量减少细胞的损伤和死亡，以避免影响单细胞测序的准确性。在捕获单个细胞时，要确保细胞的完整性和纯度，避免污染和杂交现象的

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问DNA-RNA、DNA甲基化-RNA、核小体定位-DNA甲基化-RNA联合检测的方法通量低、成本高。有哪些更合适的方法？

loveliufudan

以下是一些可能更适合的方法：1.RNA-Seq和ChIP-SeqRNA-Seq是一种高通量的转录组测序技术，可以用于检测RNA表达水平和差异表达基因。与DNA-RNA联合测序相比，RNA-Seq更适合检测转录本的数量和差异，而且通量更高、成本更低。ChIP-Seq是一种高通量的染色质免疫共沉淀测序技术，可以用于检测染色质修饰和转录因子结合位点。与核小体定位-DNA甲基化-RNA联合检测相比，ChI

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问对于无法实现单细胞分辨率的空间组学技术，可以通过哪些方法识别特定组织区域的细胞成分？

loveliufudan

可以采用以下方法来识别特定组织区域的细胞成分：免疫组化：通过免疫组化技术可以使用特异性抗体对细胞标记物进行标记，从而识别出特定类型的细胞。例如，可以使用特异性抗体来标记神经元、胶质细胞、免疫细胞等细胞类型。组织染色：染色方法也是一种识别特定组织区域细胞成分的重要方法，例如苏木精-伊红染色可以染色出细胞核和细胞质等细胞组分。基因表达分析：可以通过RNA测序和qPCR等技术对特定细胞类型的基因表达进行

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问单细胞测序是否需要生物学重复？一般需要多少个才可以？

sswei

临床样本在开展单细胞实验时，每组样本能至少达到6-8例；非临床样本开展单细胞转录组测序，每组样本数能至少达到5-6例。

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问单细胞多组学scTrio-seq是否可以同时测转录组、基因组和甲基化？

loveliufudan

是的，单细胞多组学sCTrio-seq技术可以同时测定单个细胞的转录组、基因组和甲基化。这项技术利用了单细胞测序中的三联体序列标记技术，即在同一细胞中同时分离出DNA、RNA和蛋白质，并在其上加上三联体序列标记进行测序。通过sCTrio-seq技术，可以同时测定单个细胞的基因组序列、转录组表达和DNA甲基化情况。在测序分析过程中，三联体序列标记可以帮助将RNA-seq、WGS和WGBS的数据进行整

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问请问构建基因后进行鉴定，如何通过打转基因果蝇进行鉴定验证？怎么判断没有得到相应的转基因果蝇？为什么会没有呢？

loveliufudan

首先，可以通过PCR扩增和测序来检测果蝇基因组中是否存在转基因序列。在PCR反应中，利用一对引物特异性地扩增目标转基因序列。如果扩增出来了，就说明果蝇基因组中含有该转基因。此外，可以利用Southern blot等分子生物学技术进一步验证转基因果蝇的鉴定结果。其次，生物学表型鉴定方法也是常用的鉴定转基因果蝇的方法之一。由于转基因果蝇通常会表现出一些不同于野生型果蝇的生物学特征，如体型、行为、生长发

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问【求助】酶切连接构建的载体测序结果存在突变

dxy_tdv6gc82

请问你解决这个问题了吗我也遇到了🥲

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问基因检测

sswei

ABC转运蛋白在许多组织中广泛表达，如肠道、肝脏、肾脏、血脑屏障、血睾丸屏障、胎盘和外周血细胞等，特别是淋巴细胞，所以可以检测。

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问求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗？

huarenqiang5

质粒保存在这两种温度时一般不会出现断裂及消失。

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问求助 | 质粒保存在-20℃和-80℃会断裂或者消失吗？

loveliufudan

长期反复冻融会对质粒DNA的完整性造成一定的影响，导致质粒DNA的断裂或降解。此外，即使在-80°C下保存，长期保存也可能会导致质粒DNA的降解。因此，即使质粒A和质粒B、C一样都是在-20°C下保存的，由于经历了不同程度的冻融和保存时间，质粒A的完整性可能已经受到了影响，从而导致转染效果不如以前。建议重新制备新的质粒A，避免反复冻融，并尽量缩短其保存时间，以保证质粒DNA的完整性。

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问代谢组学数据处理求赐教

沫子大大

是的，同一个代谢物在两次检测中得到的编号不一样，m/z和RT值不一样，可能是由于两次送检的样品不完全一样导致的。质谱分析通常会受到样品制备、质量、保存和运输等因素的影响，这些因素可能会导致检测结果的差异可能会导致代谢产物的含量和组成发生变化从而影响其质谱特征此外，样品制备过程中的误差、仪器的精度和灵敏度等因素也可能会导致检测结果的差异因此，为了获得可靠的质谱分析结果，需要在制备样品和进行质谱分析前

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问PCR扩增后期条带很淡

loveliufudan

最可能的原因可能是模板DNA降解或消失。这可能是由于DNA质量不佳、PCR反应体系中存在抑制因素、PCR反应过程中的外界环境因素（例如温度、时间等）等因素导致的。建议您对实验过程中的样品和反应条件进行全面的评估，包括DNA质量、PCR反应体系的组成和浓度、PCR反应的温度和时间等方面。此外，如果样品存在污染，可能也会影响PCR反应的效果，因此也要注意样品的纯度和质量。最好对PCR产物进行测序确认，

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问易错pcr如何才能p出亮的条带

汤姆卜丽波

主要是你要用到特异性高的引物，然后循环时间多一点

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问电转感受态大肠杆菌如何制备，电转流程是什么，其过程需要注意什么细节

sswei

制备电转感受态大肠杆菌步骤:1.挑选一个大肠杆菌菌落，并将其接种在20mL LB培养基中，并在37°C振荡培养过夜。2.以1％的接种量接种20mL LB培养基，并在37°C下以230 rpm的转速摇动3小时。3.取1ml培养物，冰浴30分钟，在4℃以4,000 r / min离心3分钟，然后除去上清液。4.加入500 ul冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4℃以4,0

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问EMSA实验中纯化蛋白的量和已标记探针的比例是多少？

sswei

对每一个特定的结合蛋白和探针，所用纯化蛋白的摩尔数是标记探针的5倍。

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问请问荧光素酶底物容易失活吗？

sswei

荧光素酶可以在零下4℃以下的温度下保存,但是时间不能太久。如果放置在室温2小时，很可能会失活。

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问单细胞转录组测序新手求助？

loveliufudan

一般来说，对于细胞核/细胞质比例较高的细胞（如血细胞），选择置备细胞核悬液可以提高RNA测序的灵敏度和特异性；对于细胞核/细胞质比例较低的细胞（如神经元），选择置备细胞质悬液可以获得更全面的转录本信息。此外，对于一些有细胞壁或有刺突的细胞（如酵母菌或植物细胞），需要先进行细胞壁或细胞膜的破碎，然后分别置备细胞核悬液和细胞质悬液。至于哪种悬液的RNA质量更高，一般来说，置备细胞核悬液可以获得更高的R

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问请问用于单细胞检测样本负80冰箱里能够保存多久？

橙汁儿青柠味

一般放一年内都还行，不过建议还是用新鲜样品

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问求助，plko.1酶切条带很奇怪

loveliufudan

以下是一些可能的解释：酶切位点：请确保BshT1和EcoR1的酶切位点是正确的。如果酶切位点存在问题，可能导致不完整的酶切或完全没有酶切。您可以查看质粒的序列，或使用其他方法（如限制性内切酶消化或测序）来验证酶切位点是否正确。酶切反应条件：请确保使用的酶切反应缓冲液、酶的浓度和反应时间都是正确的。有时候，过高或过低的浓度、反应时间不足或过长，可能导致不完全的酶切或者不正确的酶切。质粒问题：即使来自

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