实验问答22,021,257 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问DC细胞的抗原提呈实验步骤？

周末也要努力呀

DC细胞抗原提呈实验步骤如下：1. 培养和收集DC细胞：使用培养基（如RPMI 1640）培养DC细胞，通常使用骨髓源或外周血单个核细胞（PBMC）分离的细胞。收集细胞后，用PBS洗涤细胞。2. 处理抗原：选择合适的抗原，如蛋白质、多肽或细胞裂解物。将抗原处理成合适的浓度。3. 刺激DC细胞：将DC细胞与抗原共同培养。通常使用1-2μg/mL的抗原浓度。培养时间可以根据实验需要而定，一般为24-4

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问纯肽与钙螯合，加入9倍乙醇但没有螯合物的沉淀，如何能得到肽钙螯合物的沉淀呢？

dxy_sbyagsy6

同学你好，请问你解决了吗，我也遇到这个问题了，求求了🙏

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问有何种方法可以证明TLR4受体可以识别PGN?

周末也要努力呀

1. 细胞系实验：使用TLR4表达的细胞系（如HEK293T/TLR4细胞）和对照细胞系（如HEK293T/空白细胞）进行实验。将PGN添加到细胞培养基中，观察TLR4细胞系是否产生细胞因子（如TNF-α、IL-6等）的释放，而对照细胞系则不产生。这表明TLR4受体能够识别PGN并触发细胞信号通路。2. RNA或蛋白质水平的检测：使用实时定量PCR或免疫印迹等技术，检测TLR4基因或蛋白质的表达水

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问测定禽流感病毒H9N2的EID50，接胚后48h吸取尿囊液测血凝，发现都无血凝性，是怎么回事？-7稀释度死亡3个，-8死亡2个

土井挞克树

是否存在抗凝剂污染导致的凝集度改变，也有可能是细菌感染了

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问求问怎么用软件预测蛋白的靶标位点，用什么软件比较好，求问，有偿求助

Dr_劉医生

都是用机器学习的方法，比较常用的是CSS-Palm，入门相对简单，首先搜索“CSS-Palm”或者复制网站地址进入（http://csspalm.biocuckoo.org/）。 STEP1：点击“ONLINE”，左侧显示的是我们可以预测的修饰类型。比如我们以乙酰化为例，点击进入乙酰化位点预测界面。 STEP2：点击界面上方“PREDICTION”，这里需要用到的蛋白序列的FASTA格式，选中所

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问用邻甲酚酞络合酮比色法测肽钙螯合物的钙含量时，是否需要将肽钙螯合物的钙脱除下来转变为离子钙再进行测定？如何脱除？

huarenqiang5

操作步骤：1、制备样品：①血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于 Ca的检测。②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于 Ca的检测。③高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的 Ca，可以使用 ddH2O稀释，不宜使用普通蒸馏水稀释。2、配制 Ca显色工作液：临用前，取 Ca Assay Buffer和 OCPC显

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问siRNA转染细胞，24小时可以提RNA吗？

龙大人驾到

在进行siRNA转染后的24小时内，通常无法直接从细胞中提取足够的RNA用于下游分析。这是因为siRNA转染后，siRNA需要一定时间才能进入细胞并发挥作用，以降低目标基因的表达水平。此过程需要一定的时间，并且目标基因的降低可能需要更长的时间才能观察到。通常，在进行siRNA转染后，需要等待一定的时间（通常是24至72小时）以使siRNA充分发挥作用并降低目标基因的表达。这样，细胞中的RNA水平才

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问石蜡切片细胞不成形，部分组织脱落。求大神指点！应该怎么解决呢？

龙大人驾到

当在制备石蜡切片过程中遇到细胞不成形和组织部分脱落的问题时，以下是一些可能的解决方案：1. 固定和处理组织时注意优化：确保你在固定组织时使用适当的固定剂和处理方法。不同类型的组织和细胞可能需要不同的固定和处理条件。确保使用适当的浓度和固定时间，并遵循标准的组织处理步骤。2. 组织处理中的脱水和浸渍：在脱水和浸渍步骤中，确保逐渐将组织转移到石蜡中，以确保组织的完整性。逐渐增加浓度的醇溶液（例如，70

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问Lineweaver-Burk 双倒数法判断出对α-葡萄糖苷酶的抑制类型，具体步骤怎么做

龙大人驾到

使用Lineweaver-Burk双倒数法（Lineweaver-Burk plot）可以帮助确定对α-葡萄糖苷酶的抑制类型，常见的抑制类型包括竞争性抑制、非竞争性抑制和混合型抑制。以下是使用Lineweaver-Burk双倒数法进行抑制类型判断的具体步骤：1. 准备实验样品：准备一定浓度范围内的底物（α-葡萄糖）和不同浓度的抑制剂（例如，抑制剂A、B、C等）。确保所有试剂的浓度和制备方式准确无误

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问用PBS重悬细胞300g离心10min，重复两次，第一次离心细胞沉淀还多，第二次离心没有看到细胞沉淀请问这是怎么回事

huarenqiang5

考虑可能是没有离下来或是你弃上清的时候将细胞团块不小心吸走了。

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问c57小鼠，8周龄，结肠炎模型，需要定制高色氨酸饲料，饲料中添加色氨酸的量一般为多少啊？在原基础上添

huarenqiang5

饲料中在原基础上添加色氨酸为0.05%左右。

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问质粒转染和提取的全步骤

小小翻车鱼

以下是质粒转染和提取的全步骤：质粒转染步骤：1. 质粒DNA制备：首先从含有目标基因的质粒中提取质粒DNA。提取过程包括细胞裂解、质粒与染色体DNA分离、乙醇沉淀等步骤。2. 转染试剂和培养基的准备：选择合适的转染试剂，如脂质体转染试剂、电穿孔转染试剂等。准备好宿主细胞，如细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞，并将细胞接种到合适的培养基中。3. 转染操作：将质粒DNA与转染试剂混合，形成转染复合物。

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问纯化好的蛋白放-40℃冰箱一段时间后，拿出解冻，发现有白色絮状沉淀物，请问这是什么原因导致的，蛋白还能用吗，能用要怎么处理沉淀？

小小翻车鱼

白色絮状沉淀物可能是由于PBS缓冲液中的盐类结晶所致。这种情况下，蛋白质可能仍然可以使用，但需要进行一些处理。首先，将蛋白质样品离心，去除上清液中的沉淀物。然后，可以使用滤器或者离心管等工具将蛋白质样品过滤或离心，去除残留的盐类结晶。最后，可以重新调制PBS缓冲液，并将蛋白质样品溶解在其中。需要注意的是，如果蛋白质样品的结晶较为严重，或者出现了其他异常情况，建议重新制备蛋白质样品。此外，在保存蛋白

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问SiRNA转染iMAX的作用和原理?

sswei

siRNA的抑制作用是通过其与AGO蛋白组装成的RNA诱导沉默复合体（RISC）发挥的。一条链被降解，另一条链则与靶基因的mRNA互补配对，使其被切割降解，从而达到治疗相关疾病的目的。与传统的基因治疗相比，siRNA具有高度特异性、快速、可逆性等优点，可以应用于各种真核生物的基因功能研究，药靶发现及药物筛选中广泛应用。例如siRNA靶向恶性肿瘤的基因可以通过局部或系统性给药来治疗肿瘤，病毒感染和遗

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问求问想做角膜内皮的内皮间质转化，用角膜内皮细胞系可以么？还是必须要用原代细胞？

高山云初

尽量用原代，其他这些细胞来源仍处在实验阶段

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问测氨氮磷的工作曲线可不可以用别人的会不会有误差什么导致的

土井挞克树

如果是同一批样品你是可以用别人的曲线

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问钼酸铵测总磷过硫酸钾消解的步骤是一定要有吗

高山云初

是的,测定总磷必须消解,因为一部分磷是以有机物形式存在的,钼酸铵分光光度法测得的都是溶解态的磷,只有通过消解才可以让有机物中的磷以溶解态形式存在

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问废水里光合细菌投加量多少为宜，藻类投加量多少为宜

huarenqiang5

投加100ppm的光合细菌。藻类的除去投加量为0.4-0.8mg/L。

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问按1比3加入磷酸缓冲液是加入1克样品添加3毫升酸缓冲液算吗

土井挞克树

是的1:3就是1g:3ml的量

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问检测油脂微囊粉中的脂肪酸是参照国家标准GB5009.168-2016中的酸水解法嘛？

土井挞克树

是的，这些都是参照酸水解法的国家标准的

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