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科研学霸天团，48小时有问必答

问请问有关于等温滴定量热的相关内容吗？

dxywode

等温滴定量热（isothermal titration calorimetry，ITC）与荧光偏振类似，也是一种研究生物分子间相互作用的先进技术手段。ITC检测方式与化学反应中的酸碱滴定法相似，在ITC测定中，首先将一种反应物置于一个温控样品池中，并通过一个热电偶回路与一个参比池相偶联，样品池和参比池处于相同的外部环境。特定的滴定剂（按实验需要选择）定量滴加到样品池中，当样品与滴定剂发生反应时，样

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问同一管稀释后的一抗，跑不同批次的同种处理的样品，条带由单条带变成了多条带，操作是没变的，就只有样品批次不同，是怎么回事呢？

颜渊溪桥

如果抗体稀释液不是反复用过的，如果两次跑胶操作没问题，如果样品没有降解，那可能是个实验现象嘞，主要是得看同样没问题的操作下重复的结果。

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问为什么电泳的条带歪的，并且如何计算上样量？

小布丁瑶瑶

第一，所配制的胶有问题。比如:配方有没有错、浓度有没有错或者高低。凝固时间是否合适。第二，所配的电泳缓冲液问题。比如，配方浓度等是否正确。跟换缓冲液，重新配制。第三，电泳条件。电泳条件是否合适，电泳电压、电流和时间影响。电压是否稳定。这三者是出现电泳效果不好的主要原因。试着去改善，看能不能解决问题。当然了可能还有其他方面问题。

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问关于免疫组免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？中染色不均的，该如何考虑？

dxywode

免疫组织荧光，一定首选冰冻切片而非石蜡切片。两者的区别主要在于冰冻切片能较完整地保存抗原免疫活性，但组织结构会受到冰晶等的影响而变形，石蜡切片则相反。虽然石蜡切片可以做抗原修复，但是，它不是麻烦嘛！

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问消除过氧化物酶，用过氧化氢的多吗？成品的内源性氧化物酶阻断剂效果咋样？

小布丁瑶瑶

消除过氧化物酶实验室用过氧化氢挺多的，成品的内源性氧化物阻断剂过氧化酶是催化剂，是蛋白质成分，效果挺好的，希望帮到您喔。

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问免疫荧光是选石蜡切片好还是冰冻切片好？

Kimser

个人倾向于石蜡切片，毕竟条件有限，虽然可能稍微麻烦点，时间长点，但是保存的时间也长，这点挺不错的

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问COIP研究蛋白互作过程中，待检测的蛋白分子量在55kD时，经常被抗体的轻重链挡住，有什么好的解决方案

txs900416

使用不同来源的抗体做ip和验证可以避免，如果所有抗体都是相同来源的，可以使用二抗为抗相应igg轻链的抗体验证

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问免疫组化怎么防止封闭过度

今天摆烂了咩

封闭不充分出现非特异性结合，可以延长封闭时间，同时担心封闭过度导致染色弱，这就需要封闭时间最好不超过十分钟，实验的具体条件最终还是要自己摸索的，可在十分钟范围内自行摸索一下最合适的时间再进行实验

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问体外泛素化实验杂不到泛素修饰条带怎么回事呢

西柚味的芋圆

这个可能有多种因素的原因。先要看看抗体是不是有效，其次你的细胞有没有进行泛素化的过表达，然后是不是带标签的。还有加入mg132的时间可能需要摸一下。时间是关键，我的细胞泛素化发生的太快了，

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问请问可不可以同一个共聚焦样品，同时染红光和绿光，然后测共定位情况啊？

dxy_8y6odnaq

可以例如经典死活双染 Calcein AM 和PI 但是需要考虑串色问题（选择合适波长可避免）

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问补体激活途径有哪些？有何区别？

此用户已注销

3条途径:经典途径，旁路途经，mbl途径①溶解和杀伤作用：细菌进入机体后，细菌的细胞壁脂多糖可通过替代激活途径激活C3（属非特异性免疫），细菌与特异性抗体结合后可通过经典激活途径激活补体（属特异性免疫）。2.免疫粘附作用：与C3b结合的颗粒或抗原-抗体复合物，有粘附灵长类红细胞或非灵长类血小板的能力。③趋化作用：补体在激活过程中释放的C3a、C5a、C567等对中性粒细胞和巨噬细胞有趋化作用，可吸

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问酶联免疫吸附试验中的酶结合物中对酶的要求有哪些？该怎么选择？

郭郭的郭郭

酶的要求：一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：首先活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。然后易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。并且作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。还要用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激

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问染色不清楚的原因是什么？

dxywode

应该是染液的问题哦，缓冲液的PH也有关系，最好在显微镜下边染色边观察。

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问包因溶液用什么替代呢

LFF520宣城

HNO3：HCl：H2O=1：1：1配备液替代

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问关于免疫组化中染色不均的问题出现花斑样染色，大小不均，部分连成片，该如何考虑？

txs900416

可能是1、封闭不完全；2、抗体浓度太高，导致区域性结块染色；3、pbs洗涤不完全，导致过量抗体的非特异性结合

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问免疫透射比浊法有没有更显著的方法减少效果影响

郭郭的郭郭

透射免疫比浊法是根据抗原抗体结合后引起液体介质浊度改变，使光线透过量减少，在一定范围内，透射光被吸收量与IC量呈正相关，依所测吸光度值推算待测抗原量的分析技术。主要注意抗原或抗体不要量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差；可以减少效果影响。还有就是应维持反应管中抗体蛋白始终过剩；不要受到脂血的影响。

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问红斑狼疮的药物治疗？

府宅

如果仅有关节或者皮肤粘膜的这种受累比较轻的红斑狼疮，我们可以在密切监测病情，不选择激素，而选择非载体药、抗疟疾药，或者沙利度胺，这些药也能让病情得到有效的控制。

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问为什么乙肝表面抗原胶体金法阴性但是酶联免疫吸附试验阳性？

Kimser

酶联免疫法和胶体金免疫层析法均为测定乙肝表面抗原的可靠方法,但胶体金免疫层析法的灵敏度有待提高。

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问琼脂糖凝胶电泳中在规定的时间内没有跑出很好的条带，导致染色出现不清晰，分辨率不高的情况有哪些影响因素

府宅

1、DNA降解：琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧：电泳缓冲液多系使用后，离子强度降解，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳实验，建议经常更换电泳缓冲液。3、所用电泳条件不合适：电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃；巨大DNA链电泳，温度应该<15℃；检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4、DNA上扬量过多：应减少凝胶中DNA上样量。5、DNA样含盐量过

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问针对化学发光中使用的质控品是高浓度稀释比较好？还是选择各梯度的直接商品浓度比较好

yanxiaoyuhao

质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成，用于质量控制。所以选择各梯度的会比较好

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