实验问答22,851,418 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问流式细胞筛选标准问题

bamboopiggy

对，做分选，最大的问题就是细胞的皮实程度，如果细胞不够皮实，确实问题很大。可以考虑用growth mediun培养分选后的细胞。

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问细胞流式分选得率不够

bamboopiggy

如果得率不够，你又不能提高你的处理方式的话，只能提高细胞量。

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问小鼠免疫细胞的获取与计数该怎么写？

天一湖医者

免疫细胞的计数 (一)荧光抗体染色 应用范围广泛，可分别使用于B细胞、T细胞及其亚类、MФ及NK细胞的计数及表面标记的测定，多选用间接荧光抗体染色，即活细胞与其特异性单抗作用后再与荧光抗球蛋白抗体反应，经荧光显微镜观察可见膜荧光。 (二)花环形成试验 T细胞与B细胞皆可应用该试验进行计数。计数T细胞的方法称E花环形成试验(erythrocyte rosette formingcell

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问THP1这种悬浮细胞如何进行基因敲除？如何挑单克隆？

bamboopiggy

THP1 最好用电转，用病毒都不一定能进去。敲完以后，你可以用流式做单细胞打板就可以

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问流式细胞学检测时细胞有很多碎片

丁香清香

流式细胞学细胞碎片应该是死亡细胞

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问淋巴结组织分散成单个细胞

异乡人hyq

三种方法，分别是粘附贴壁法、吸附柱过滤法、磁铁吸引法。一、粘附贴壁法我们将单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，37℃温箱静置1h左右，这时候你会发现，“死皮赖脸”的单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎为纯淋巴细胞，随后用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。那么此时就达到一个分离的效果。但注意因为B细胞也有贴壁现象，分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。二、吸附柱过滤法同样将单个

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问淋巴结组织细胞流式固定

丁香清香

根据方法而定，不能一概而言。如果是测细胞内抗原的，比如抗体识别活化caspase-3, 那就要固定。其他检测功能的，比如caspas3-3活性的，就要活细胞来测试。

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问请问连翘脂苷A能通过血脑屏障吗？影响化合物药物通过血脑屏障的因素有哪些？如何确定？

异乡人hyq

连翘脂苷A可以通过血脑屏障。脂溶性越高的物质越容易通过，水溶性越强的通过能力差，与血浆蛋白的结合程度越高，通过越不易。可以通过载体转运系统，利用高选择性的载体蛋白，可以使一些难以通过血脑屏障的物质顺利入脑。

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问骨吸收实验怎样才能成功？

玩骨头的小白

骨吸收实验和破骨细胞诱导实验是一样的，只是多加了一个骨片或者牙本质片，这里要注意骨片一定是要无菌的。培养体系里应该都有抗生素的，染菌的可能很有可能就是骨片没有灭菌，或者灭菌不完全

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问HepG2传代之后形态正确吗

Topmicro

你的HepG2细胞形态没有问题，传代之前和传代之后出现形态差异还是很常见的，除了HepG2外像HT-29细胞在前一两代为球形后边会长成像黏膜组织的形态，这都是正常的。

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问用酶标仪96孔板测细胞活性氧

bamboopiggy

有空白对照组，所有数值和空白对照组比一下就可以。

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问大肠杆菌表达系统怎么减少包涵体

bamboopiggy

你只能选择一个让包涵体少的条件，没法完全避免的，降温，减速，延长时间

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问请问如何规范使用酒精计测定白酒酒精度，将高度酒准确调配成低度酒。

bamboopiggy

酒精度的测量方法1、需购置酒精计二支(规格是0°至50°和50°至100°)2、温度计一支(0°至100°，水银显示红色、刻度要清析)3、量杯一支(500毫升或1000毫升)将调制好的酒倒入量杯中。然后将酒精计小心放入量杯中，酒静置时，水平面的位置就是酒的表面度数。在将温度计底端(红色水银柱一端)置入酒中，另一端用手指捏住，观察显示温度，20°时酒精计即为标准度数。温度每超出1°酒度需减去0.35

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问请问如何规范配制 0.05mol·L-1维生素 C 溶液。

bamboopiggy

标准维生素c溶液（0.1mg/L）：准确称取10mg纯维生素c（应为洁白色，如变黄色说明已氧化不能用）溶于1%草酸溶液，定容100mL(临用前配制）。1%草酸溶液：1g草酸用蒸馏水溶解，定容至100mL这个是我从百度上查的。https://zhidao.baidu.com/question/139498071106771605.html但是鉴于你要0.05M的，我又去查了一下VitC的分子量：17

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问用作植物染色的0.25%的伊文思蓝配备方法

bamboopiggy

我查到的伊文思蓝是溶于水1mg/ml的，所以你可以直接用水溶解

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问24孔板怎么铺匀细胞啊

异乡人hyq

先在孔内加0.5至1ml培养基，再把细胞加进去。加好后，在水平桌面上前后左右各平移十次。然后在培养箱外至少放置15分钟后，再放到培养箱中培养。关键的诀窍是铺完板子后在培养箱外要放置一段时间。

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问请问食品分析溶液的配制这个实验要怎么做

异乡人hyq

氢氧化钠溶液配制：用小烧杯在台称上称取110g固体NaOH,加100mL水,振摇使之溶解成饱和溶液，冷却。→将样品移入干燥的500ml聚氯乙烯材质的试剂瓶中。→在试剂瓶上贴上标签，放置至溶液澄清。→用塑料管量取上层清液5.4ml，转移到1000ml容量瓶中，用无二氧化碳水稀释至1000mI。转入试剂瓶中，待标定备用。

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问做一下纸层析，在没有层析岗的情况下可以用玻璃培养皿装着展开液，用大烧杯倒过来盖着做吗？（层析纸点样后围成圈竖立在展开液里面）

Topmicro

直接用烧杯做不更方便吗，为啥非得在培养皿里做？拿封口膜盖着烧杯就可以了。

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问脂肪肝的细胞模型中脂肪配置

bamboopiggy

关于油酸和棕榈酸的混合物，我查的文献采用的方法为：FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于10 mL 99%酒精中，振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH（10 mol/L），混匀，置于通风橱中过夜干燥。加入10 mL蒸馏水，加热溶液至呈透明皂液样时，加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白（FFA free的），混匀。经0.22 μm CA

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问比较基因集富集分析和基因集变异性分析

异乡人hyq

基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）：用一个预先定义的基因集中的基因来评估在与表型相关度排序的基因表中的分布趋势，从而判断其对表型的贡献。基因集变异分析（Gene Set Variation Analysis，GSVA）:是一种非参数的无监督分析方法，主要用来评估芯片和转录组的基因集富集结果。主要是通过将基因在不同样品间的表达量矩阵转化成基因集在样品

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