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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
我的CHX(用DMSO溶的)实验是0 2 4 6h,请问对照的DMSO应该在什么时候加呢?
bamboopiggy
可以在一开始的时候就加上,然后和6h的一起收。因为DMSO单纯应该是不起作用的,时间就按最长的来。
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问
组织蛋白含血量太多了影响后续实验,怎样在裂解组织前应用红细胞裂解液呢?是把组织剪碎后用红细胞裂解液吗?
dxy_gwrp7ndq
新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液, 再加入红细胞裂解液
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问
有什么评价瞬转效率的方法吗(质粒进入细胞的多少)?而不是瞬转后蛋白表达效率。
bamboopiggy
转个带荧光的空质粒,可以根据荧光的强度,来判断瞬转的效率。
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问
慢病毒感染293S悬浮细胞,感染效率低,有什么提高感染效率的方法吗?除了离心
bamboopiggy
提高一下病毒浓度试试,可以用PEG8000来浓缩病毒。
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问
流水细胞中细胞死亡有点多?
bamboopiggy
可能使细胞浓度低,通过的速度太快,对细胞损伤大,最好提高一下细胞浓度,或降低一些通过速度,
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问
流式细胞分选速度如何确定?
bamboopiggy
这主要取决于要求通过的细胞的数目,如果你的细胞密度高,就可以降低一下速度,细胞密度低,就要加速,对细胞损伤就大一些。
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问
远志对小鼠的祛痰作用机制是什么,为什么是灌胃而不是注射
bamboopiggy
远志中含有丰富的植物皂甙,这种物质可以作用于能胃粘膜,刺激胃粘液的分泌,引起患者产生轻度恶心的感。 呕吐感形成以后,就刺激支气管产生连锁反应,分泌更多的物质来祛痰,所以对于痰多不化的人去,有较好的改善作用。所以这个玩意,要刺激胃黏膜,需要灌胃
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问
慢病毒文库感染293T细胞,怎么确定MOI=0.3?
bamboopiggy
MOI的计算方法:MOI值=病毒滴度(TU/mL)×病毒体积(mL)/细胞个数,你可以调整病毒的加入体积和细胞的个数,使MOI=0.3
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问
慢病毒稳转293细胞后,有的细胞会变大,有空泡状,是什么原因呢?
bamboopiggy
慢病毒对293细胞是有影响的,如果变大的细胞,和空泡的细胞不多,那就不用管,如果细胞数目多,需要降低加入病毒的浓度。
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问
fed batch过程中细胞数过多怎么降低细胞数提高活率
dxy_gwrp7ndq
可以适当提高补料渗透压,减缓细胞生长
3 回答
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问
质粒转染过程中对转染细胞的要求有哪些?
dxy_gwrp7ndq
转染时细胞密度以 70~90%(贴壁细胞)或 2×106~4×106细胞 / mL(悬浮细胞)为宜,细胞密度过高会严重影响细胞状态(周期进程阻滞,凋亡增加等)
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问
表达量高的亚克隆细胞,个头特别大,一般细胞直径在16-17左右,但是它能到20左右,而且细胞数少,有什么方法可以降低细胞直径
bamboopiggy
是不是你的这个基因影响细胞的size?你可以直接挑出单克隆,进行单独培养,看看是否和正常的有差异。
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问
分选纯度的影响因素有哪些?
bamboopiggy
标本制作要轻柔,最好提前做个预实验,不要上来就直接做
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问
流式细胞上样速度如何确定
bamboopiggy
上样速度决定分选速度,推荐上样速度取决于你用到用的机器,有个最适的速度,看你用的流式的说明。和细胞大小关系不太大,却决于细胞浓度。
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875 围观
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问
怎么最大可能筛选到高细胞活性
bamboopiggy
胰酶消化不能过,反复吹打次数也别太多,保证比较高的细胞浓度,都可以提高细胞活动。
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问
通常选择什么滤网比较合适?
bamboopiggy
滤网有份型号,有不同孔径的,一般上流式用300-400目的比较好。也可以直接买带滤网的流式管
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问
流式时得不到比较合适的浓度
天一湖医者
这个有两个办法,一是在上机前计数(可以用血细胞计数板,或者细胞计数仪)还有一个就是把样本上机后,根据机器得到的浓度现调(用PBS等缓冲液稀释)
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问
细胞不够粘稠影响效果,该怎么解决?
小暮
有时候不够粘稠影响液滴断裂,我看你用的是EDTA,建议细胞消化的时候使用Accutase代替Try psin+EDTA
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问
细胞样本制备形态问题
bamboopiggy
胰酶消化时间要够,但是又不能过,反复吹打也不能太多次,否则细胞还是会受损,这个多做几次,摸好条件。
2 回答
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问
流式细胞影响分选的结果有哪些?
bamboopiggy
确保单细胞悬液,细胞浓度够,否则时间会很长。
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