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科研学霸天团，48小时有问必答
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问
构建的原核表达载体不表达我的目的蛋白是为什么？
cpu2004
做个mRNA，如果mRNA水平就有问题加融合伙伴，尝试在C端（优先）和N端加入融合伙伴，有时候是某些蛋白的mRNA在你的表达系统中不稳定
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问
同源性太高的基因，如何设计 TALEN 靶点？
jiayitu
这个确实很大一部分都被敲除了，还有一些别人没做出来的，我这个就是这个项目组的。。
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问
大肠埃希菌能使甘露醇，蔗糖，麦芽糖产酸产气吗?
云天昊
这个是应该是可以的
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问
慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32，看其对细胞增殖凋亡的影响体外，买现成的人成纤维细胞，若不建立稳转的细胞，能说明实验的有效性吗
yyygo
慢病毒在成纤维细胞过表达IL-32，看其对细胞增殖凋亡的影响，不进行稳转细胞系构建，也能说明实验的有效性吧对细胞增殖凋亡的影响短时间的3-4天可否满足如果可以就不必进行了，那个时间太长了要持续半年耗不起
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问
大肠杆菌感受态细胞制备时的CaCl2浓度到底是多少呢？
我是金博士
我们用0.1 mol/L，参照分子克隆的来。用CaCl2·2H2O可以，只要浓度一样就行了。
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问
细胞免疫荧光用 4% 多聚甲醛固定，1% BSA 封闭，这两步可以不要吗？省去会有什么影响？
stellaff
“加荧光标记抗鼠抗体（第二抗体）工作液20ul，混匀振荡置4℃/30分钟（时间不能超过）。”请问这步必须是4℃/30分钟吗？时间不能超过，如果超过了会有什么影响？” 二抗不一定就是4℃ 30分钟，我们经常采用室温下避光孵育1小时，这样也可以得到较好的效果。细胞免疫荧光是需要固定的，根据目的蛋白的不同可以选择多聚甲醛或者丙酮，一般固定20分钟。封闭也是需要的 可以减少非特异性背景。
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问
感受态制备过程中，如何将第一次离心后的菌体悬浮？
hellokitty5
有一个诀窍就是离心的速度不能太高，如果用大型的离心机，转速在3 500-4 000 rpm 5-10分钟就可以了，只要你能把菌体离下就可以，不要太长时间，这样你的菌会很松，加上一些CaCl2轻轻弹几下就开了，再慢慢弹，慢慢摇， 包你很快做好。这是经验，试试吧。
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问
蛋白如何获取？
我是金博士
重组获得哦，通过基因克隆，表达获得蛋白。
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问
为何我提取组织 DNA 后，DNA 的纯度很低？
我是金博士
可以多管浓缩，最后过柱子的时候，把很多管的都集中到一管。
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问
显微镜目镜和物镜多少倍可以看见血小板？
论文菌
看不到的，confocal 60倍油镜 隐约能看到血小板
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问
求问刚出生胎鼠的膝关节部位软骨如何取材？
danieldan08
胎鼠太小了，不好取材，直接酶消化好了
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问
口腔材料的皮下植入实验，取材技巧？如何取出兔子体内的材料？
1706 围观
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问
链霉素的毒性反应及解救实验中可以用其他钙剂替换氯化钙吗？
我是金博士
没有特殊说明不要，同时看下氯化钙的作用。
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问
组织培养培养基
1875 围观
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问
灌胃时为何采用温水？
yuanwuping1987
体内环境温度会影响药物的ADME
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问
请大家推荐一款好用的转染试剂？
叶子的科研
N2a 也称为Neuro-2a,是小鼠来源神经瘤母细胞,对于外援物进入细胞体内很是敏感，我们实验室在转染siRNA到小鼠神经原代里面使用的是zeta life Advanced DNA RNA转染试剂,转后细胞状态基本没有变化，做wb和QPCR检测有敲低。
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问
使用脂质体瞬时转染，预实验是用空载体还是含有目的基因的载体做呢？还是两者都用
yyygo
脂质体细胞转染用目的载体做，预实验也相当于是摸索条件的了
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问
Si-RNA 脂质体 lipofectamine-iMAX 转染，敲除基之后能维持多长时间？
xy05
ｓｉＲＮＡ是瞬时的，一般７２小时
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问
FISH实验的小技巧
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问
实验设计----发酵培养基优化
2025 围观
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