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科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞免疫荧光用 4% 多聚甲醛固定，1% BSA 封闭，这两步可以不要吗？省去会有什么影响？

stellaff

“加荧光标记抗鼠抗体（第二抗体）工作液20ul，混匀振荡置4℃/30分钟（时间不能超过）。”请问这步必须是4℃/30分钟吗？时间不能超过，如果超过了会有什么影响？” 二抗不一定就是4℃ 30分钟，我们经常采用室温下避光孵育1小时，这样也可以得到较好的效果。细胞免疫荧光是需要固定的，根据目的蛋白的不同可以选择多聚甲醛或者丙酮，一般固定20分钟。封闭也是需要的可以减少非特异性背景。

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问感受态制备过程中，如何将第一次离心后的菌体悬浮？

hellokitty5

有一个诀窍就是离心的速度不能太高，如果用大型的离心机，转速在3 500-4 000 rpm 5-10分钟就可以了，只要你能把菌体离下就可以，不要太长时间，这样你的菌会很松，加上一些CaCl2轻轻弹几下就开了，再慢慢弹，慢慢摇，包你很快做好。这是经验，试试吧。

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问蛋白如何获取？

我是金博士

重组获得哦，通过基因克隆，表达获得蛋白。

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问为何我提取组织 DNA 后，DNA 的纯度很低？

我是金博士

可以多管浓缩，最后过柱子的时候，把很多管的都集中到一管。

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问显微镜目镜和物镜多少倍可以看见血小板？

论文菌

看不到的，confocal 60倍油镜隐约能看到血小板

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问求问刚出生胎鼠的膝关节部位软骨如何取材？

danieldan08

胎鼠太小了，不好取材，直接酶消化好了

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问口腔材料的皮下植入实验，取材技巧？如何取出兔子体内的材料？

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问链霉素的毒性反应及解救实验中可以用其他钙剂替换氯化钙吗？

我是金博士

没有特殊说明不要，同时看下氯化钙的作用。

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问组织培养培养基

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问灌胃时为何采用温水？

yuanwuping1987

体内环境温度会影响药物的ADME

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问请大家推荐一款好用的转染试剂？

叶子的科研

N2a 也称为Neuro-2a,是小鼠来源神经瘤母细胞,对于外援物进入细胞体内很是敏感，我们实验室在转染siRNA到小鼠神经原代里面使用的是zeta life Advanced DNA RNA转染试剂,转后细胞状态基本没有变化，做wb和QPCR检测有敲低。

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问使用脂质体瞬时转染，预实验是用空载体还是含有目的基因的载体做呢？还是两者都用

yyygo

脂质体细胞转染用目的载体做，预实验也相当于是摸索条件的了

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问Si-RNA 脂质体 lipofectamine-iMAX 转染，敲除基之后能维持多长时间？

xy05

ｓｉＲＮＡ是瞬时的，一般７２小时

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问FISH实验的小技巧

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问实验设计----发酵培养基优化

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问Metascape没有结果什么问题

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问碱性磷酸酶化学发光底物使用

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问双荧光素酶检测miRNA靶基因互作分析的一点疑问

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问小鼠免疫荧光染色抗体选择

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问WB之前测蛋白浓度总是不准确，actin不一样

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