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科研学霸天团，48小时有问必答

问体外泛素化实验杂不到泛素修饰条带怎么回事呢

西柚味的芋圆

这个可能有多种因素的原因。先要看看抗体是不是有效，其次你的细胞有没有进行泛素化的过表达，然后是不是带标签的。还有加入mg132的时间可能需要摸一下。时间是关键，我的细胞泛素化发生的太快了，

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问请问可不可以同一个共聚焦样品，同时染红光和绿光，然后测共定位情况啊？

dxy_8y6odnaq

可以例如经典死活双染 Calcein AM 和PI 但是需要考虑串色问题（选择合适波长可避免）

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问补体激活途径有哪些？有何区别？

此用户已注销

3条途径:经典途径，旁路途经，mbl途径①溶解和杀伤作用：细菌进入机体后，细菌的细胞壁脂多糖可通过替代激活途径激活C3（属非特异性免疫），细菌与特异性抗体结合后可通过经典激活途径激活补体（属特异性免疫）。2.免疫粘附作用：与C3b结合的颗粒或抗原-抗体复合物，有粘附灵长类红细胞或非灵长类血小板的能力。③趋化作用：补体在激活过程中释放的C3a、C5a、C567等对中性粒细胞和巨噬细胞有趋化作用，可吸

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问酶联免疫吸附试验中的酶结合物中对酶的要求有哪些？该怎么选择？

郭郭的郭郭

酶的要求：一个酶蛋白分子每分钟可催化103～104个底物分子转变成有色产物。用于标记的酶应符合：首先活性要强，催化反应的转化率高，纯度高。然后易与抗体或抗原偶联，标记后酶活性保持稳定，且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。并且作用专一性强，酶活性不受样品中其他成分的影响，受检组织或体液中不存在与标记酶相同的内源性酶或抑制物。还要用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激

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问染色不清楚的原因是什么？

dxywode

应该是染液的问题哦，缓冲液的PH也有关系，最好在显微镜下边染色边观察。

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问包因溶液用什么替代呢

LFF520宣城

HNO3：HCl：H2O=1：1：1配备液替代

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问关于免疫组化中染色不均的问题出现花斑样染色，大小不均，部分连成片，该如何考虑？

txs900416

可能是1、封闭不完全；2、抗体浓度太高，导致区域性结块染色；3、pbs洗涤不完全，导致过量抗体的非特异性结合

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问免疫透射比浊法有没有更显著的方法减少效果影响

郭郭的郭郭

透射免疫比浊法是根据抗原抗体结合后引起液体介质浊度改变，使光线透过量减少，在一定范围内，透射光被吸收量与IC量呈正相关，依所测吸光度值推算待测抗原量的分析技术。主要注意抗原或抗体不要量大大过剩，可出现可溶性复合物，造成误差；可以减少效果影响。还有就是应维持反应管中抗体蛋白始终过剩；不要受到脂血的影响。

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问红斑狼疮的药物治疗？

府宅

如果仅有关节或者皮肤粘膜的这种受累比较轻的红斑狼疮，我们可以在密切监测病情，不选择激素，而选择非载体药、抗疟疾药，或者沙利度胺，这些药也能让病情得到有效的控制。

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问为什么乙肝表面抗原胶体金法阴性但是酶联免疫吸附试验阳性？

Kimser

酶联免疫法和胶体金免疫层析法均为测定乙肝表面抗原的可靠方法,但胶体金免疫层析法的灵敏度有待提高。

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问琼脂糖凝胶电泳中在规定的时间内没有跑出很好的条带，导致染色出现不清晰，分辨率不高的情况有哪些影响因素

府宅

1、DNA降解：琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧：电泳缓冲液多系使用后，离子强度降解，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳实验，建议经常更换电泳缓冲液。3、所用电泳条件不合适：电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃；巨大DNA链电泳，温度应该<15℃；检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4、DNA上扬量过多：应减少凝胶中DNA上样量。5、DNA样含盐量过

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问针对化学发光中使用的质控品是高浓度稀释比较好？还是选择各梯度的直接商品浓度比较好

yanxiaoyuhao

质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成，用于质量控制。所以选择各梯度的会比较好

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问用目标蛋白做IP，WB的时候孵Ub，但是目标条带位置没有ladder，该怎么改善条件？

dxywode

你可以加 NEM 抑制去泛素酶（DUB）的活性，或者干脆用 denaturing IP 去拉目的蛋白，然后检测泛素化。如果真的很难做，可以试试看过表达目的蛋白，再 IP ，当然无论如何也要用 NEM 或者 denaturing IP.

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问树突状细胞培养需要什么条件？

dxywode

在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

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问免疫组化一抗敷育时间的问题，越长越好吗？有的推荐说至少一小时，通常推荐3小时，避免造成假阴性，如果敷育过夜或者24小时会不会引

dxywode

一抗孵育条件包括孵育时间、温度和抗体浓度，三者之间是相对的关系。浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度而时间决定反应的量。一抗孵育温度有：4℃、室温、37℃，其中4℃效果最佳。至于孵育时间，这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃则要过夜。其中，4℃最佳，反应最温和，背景较浅。37℃反应速度较快，时间较短。室温个人感觉不如前两者，条件不好控制。最常见的就是4度过夜这种。

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问我想设计一个实验研究的是姜黄素对小鼠作用，主要和一些介素有关，如小鼠介素2、IL-1B、IL-12、肿瘤坏死因子B。哪个最紧密？

peaceful13

你应该先搜索文献，这些因子主要跟哪些细胞相关，采取什么样的形式进行检测，需要有目标样本的确定性，再设计相关实验方法

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问ELSA时酶与抗体交联，你们一般选择什么方法，郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法试过2次，效果一般，配方按照标准配的

bqejjh123

酶与抗体交联的方法有许多种，根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠发。尤以简易过碘酸钠法更为常用。

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问二抗敷完了发现敷错了，怎嘛办?

bqejjh123

如果敷错了，可以洗一下再敷，不然二抗会污染

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问大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性有没有影响？如果抗体很快(1-2 周)会使用，推荐在如何保存？

府宅

试剂盒中的抗体和酶在4度可以放半年

3 回答1185 围观

问流式细胞术最多能用几种抗体去筛选t细胞

府宅

淋巴细胞4.CD3 + T淋巴细胞5.CD4 +与CD8 + T淋巴细胞

4 回答809 围观

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