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科研学霸天团，48小时有问必答

问标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？

天一湖医者

填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。

3 回答547 围观

问蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来，怎么办？

天一湖医者

加甘油/蔗糖：增加溶液粘度，降低蛋白之间碰撞几率，从而降低聚合概率降低孵育时间：减少蛋白和填料的结合时间。

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问若转膜不完全时，下一步该怎么办？

bamboopiggy

换转膜的三明治夹子，结果不可信，没有继续往下做的必要了，当然，看看抗体是不是能用，也是可以的。

2 回答508 围观

问如果上样量超载了怎么办？

bamboopiggy

wb上样多了的话，尝试用strip buffer洗洗，或者是降低一抗，二抗的浓度。

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问做 200kd 以上蛋白的 Western Blot 时注意事项？

bamboopiggy

用8%的胶，甚至可以用6%的胶，转膜时间要相对延长，买分子量差不多的marker，看转膜是否转过去了。

3 回答933 围观

问蛋白的上样量要怎样根据实验的要求来确定？

bamboopiggy

一般你跑wb的话，40ug/ul就足够了，如果你要跑考染的，也可以用40ul的，但是银染，你只需要用1/6的量就可以了。

3 回答1826 围观

问为什么浓缩胶和分离胶的电压不一致？同样的电压可以吗？

bamboopiggy

可以一样的电压，电压不一样，是想在浓缩胶中，将蛋白压成一条线，所以想让蛋白走的慢，在分离胶中，是为了把条带分开，这时候用低电压，其实也是可以的，就是时间太长。

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问转膜时何为湿法，何为半干法？

bamboopiggy

湿转法就是转膜的时候，膜胶等都是泡在转膜液中的，半干转，是做三明治夹心的时候，用转膜液赶走气泡等，然后直接加入电转仪，不用加电转液，两个方法都好用。

3 回答1421 围观

问Transwell实验上下层培养基为什么不会相互扩散？

bamboopiggy

上下层的培养基会扩散的，但是还是有血清的浓度梯度存在的，well内的细胞在无血清的培养基中，会向浓度高的有血清的培养基中爬，尤其是带ECM胶的。

2 回答1187 围观

问细菌的SERS成像怎么做呢？

bamboopiggy

用3-巯基苯硼酸预标记细菌细胞，使其与金纳米粒子络合。对表面增强拉曼光谱进行整体整理，以生成细菌种群的全景化学图像。该方法已成功地用于研究大量细菌种群在选定植物组织上和组织中的分布。这项研究表明，SERS成像在研究复杂基质中的细菌细胞方面具有巨大潜力，在某些方面优于电子显微镜和荧光显微镜。链接： https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33592747

1 回答199 围观

问求常用的产生物膜的细菌菌种？

一个小哭包

目前，对生物膜研究最多的是表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等

3 回答1017 围观

问请问这种核苷酸同源性和氨基酸同源性分析的图，是用什么软件做出来的呢？

天一湖医者

有很多，比如下载一个DNAMAN就可以了！

5 回答1478 围观

问病毒感染滴度IFU检测时，在加甲醇固定过程中，有明显的白色细胞悬起来正常吗？

cxsm

正常情况下甲醇固定的时候，细胞会变白，死细胞在你去培养基的时候基本会带走，有可能是你加甲醇的时候把细胞冲起来了。

2 回答489 围观

问细胞增殖检测（MTT法）细胞数问题？

天一湖医者

移液时的误差，或者部分边缘蒸发。

3 回答640 围观

问细胞增殖检测细胞浓度问题？

天一湖医者

细胞的浓度并不需要那么精确,关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平。比如做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较。后来换用 10000/ml,结果就很好。当然细胞数也不能太多,这其实取决于你细胞的生长速度,生长快的细胞,可接种浓度低点。这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响,比如接触抑制,营养竞争。总之,做

4 回答730 围观

问洗必泰栓剂中冰片与乙醇的作用是什么？

未来9

冰片，局部应用有止痛及温和的防腐作用，同时也具有抑菌抗炎作用；乙醇，应该是用来溶解或稀释主药然后与基质混合的溶剂

4 回答5684 围观

问请问句子里面的（v/v）、（v/w）这些是什么意思啊？求尽量详细

bamboopiggy

w=weightv=volume，就是体积重量比，或体积体积比

5 回答3275 围观

问HEK293瞬转表达抗体活性偏低

bamboopiggy

你收的太晚了，瞬转一般48-72h就到表达高峰了，你提早收试试

4 回答1235 围观

问牛乳酸度的测定这个实验应该怎么做?

迟C迟

取一定量的牛奶，以酚酞作指示剂，再用一定浓度的碱液（通常用0.1毫摩尔/升的NaOH）滴定，根据消耗碱液的量，用T度（°T）表示酸度。实际测定时，可取100毫升牛奶（生产单位为了节省原料奶，也可取10毫升来滴定，这时需将碱液的消耗数乘以10），用酚酞作指示剂，以0.1摩尔的NaOH滴定，按所消耗的毫升数来表示，消耗1毫升为1°T。正常牛奶的酸度通常为16～18°T。滴定酸度受牛奶的稀释度和酸度影响

7 回答1331 围观

问疫情期间，如何采购国外的产品

dxy_gwrp7ndq

可以在网站购买或通过外贸代理公司采购，各课题负责人及实验人员采购前填写《科研用进口试剂、仪器设备备案表》，交至所属实验室，实验室定期至医院感控办备案，医院将根据具体采购物品种类进行抽检。

3 回答550 围观

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