实验问答21,858,538 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问请问如何规范配制 0.05mol·L-1维生素 C 溶液。

bamboopiggy

标准维生素c溶液（0.1mg/L）：准确称取10mg纯维生素c（应为洁白色，如变黄色说明已氧化不能用）溶于1%草酸溶液，定容100mL(临用前配制）。1%草酸溶液：1g草酸用蒸馏水溶解，定容至100mL这个是我从百度上查的。https://zhidao.baidu.com/question/139498071106771605.html但是鉴于你要0.05M的，我又去查了一下VitC的分子量：17

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问用作植物染色的0.25%的伊文思蓝配备方法

bamboopiggy

我查到的伊文思蓝是溶于水1mg/ml的，所以你可以直接用水溶解

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问24孔板怎么铺匀细胞啊

异乡人hyq

先在孔内加0.5至1ml培养基，再把细胞加进去。加好后，在水平桌面上前后左右各平移十次。然后在培养箱外至少放置15分钟后，再放到培养箱中培养。关键的诀窍是铺完板子后在培养箱外要放置一段时间。

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问请问食品分析溶液的配制这个实验要怎么做

异乡人hyq

氢氧化钠溶液配制：用小烧杯在台称上称取110g固体NaOH,加100mL水,振摇使之溶解成饱和溶液，冷却。→将样品移入干燥的500ml聚氯乙烯材质的试剂瓶中。→在试剂瓶上贴上标签，放置至溶液澄清。→用塑料管量取上层清液5.4ml，转移到1000ml容量瓶中，用无二氧化碳水稀释至1000mI。转入试剂瓶中，待标定备用。

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问做一下纸层析，在没有层析岗的情况下可以用玻璃培养皿装着展开液，用大烧杯倒过来盖着做吗？（层析纸点样后围成圈竖立在展开液里面）

Topmicro

直接用烧杯做不更方便吗，为啥非得在培养皿里做？拿封口膜盖着烧杯就可以了。

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问脂肪肝的细胞模型中脂肪配置

bamboopiggy

关于油酸和棕榈酸的混合物，我查的文献采用的方法为：FFA贮备液中油酸与棕榈酸的比例为2∶1。溶解所需剂量的油酸和棕榈酸于10 mL 99%酒精中，振摇1 h。每10 mmol/L FFA加入40 μL的NaOH（10 mol/L），混匀，置于通风橱中过夜干燥。加入10 mL蒸馏水，加热溶液至呈透明皂液样时，加入40 mL冰冷的10%小牛血清白蛋白（FFA free的），混匀。经0.22 μm CA

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问比较基因集富集分析和基因集变异性分析

异乡人hyq

基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）：用一个预先定义的基因集中的基因来评估在与表型相关度排序的基因表中的分布趋势，从而判断其对表型的贡献。基因集变异分析（Gene Set Variation Analysis，GSVA）:是一种非参数的无监督分析方法，主要用来评估芯片和转录组的基因集富集结果。主要是通过将基因在不同样品间的表达量矩阵转化成基因集在样品

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问大家有没有提过植物细胞外囊泡或者叫外泌体或外泌体样纳米颗粒

天一湖医者

步骤：(1)上清液分离：将细胞培养后的培养基，离心去除杂质，分离出培养上清液；(2)一次提取：将步骤(1)所述培养上清液与外泌体提取液混合后进行孵育，孵育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；(3)二次提取：将步骤(2)所述含外泌体的浓缩液加入无菌pbs溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体。

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问纸层析定性糖类物质，显色剂里的硝酸银的水丙酮饱和溶液，加多少硝酸银啊？配方:AgNO3的水丙酮饱和溶液，V水:V丙酮=1:200

天一湖医者

硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，

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问关于细胞凋亡的流式细胞术

天一湖医者

流式图有很多种，最常用的是流式直方图和流式散点图，还有流式等高线图。流式直方图只能显示一个通道的信息，流式散点图和流式等高线图可以同时显示2个通道的信息。　　流式通道　　散射光通道　　散射光通道有两个，包括FSC通道和SSC通道，一般所有的流式细胞仪均有这2个散射光通道；　　FSC，即前向角散射，它的值代表细胞的大小。细胞体积越大，其FSC值就越大。所以可以利用细胞的FSC值初步比较细胞的

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问sashimi plot 图怎么看呢，图里的线线上的数字以及不同的线连接，这些都是啥意思呢，整不明白了

天一湖医者

IncLevel1可被认作是exon inclusion level（ψ），是Exon Inclusion Isoform在总（Exon Inclusion Isoform + Exon Skipping Isoform）所占比例I 是指mapping到exon inclusion isoform上的reads数，对应结果表格中的IC_SAMPLE_1S 是指mapping到exon skippi

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问药物作用于癌细胞，Bax蛋白表达降低，是否能说明不是通过凋亡而导致细胞死亡？

bamboopiggy

你不能只检测Bax啊，把bcl2还有caspase3检测一下再说，还要加个rescue的实验

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问从细菌中提取酶，用常规的方法总是拿不到我要的蛋白。是不是也可以加点甘油或者PEG来提取?

天一湖医者

常规方法不行的话，加甘油也不一定有作用，可以试试不同ph

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问HPLC是用来分析检测or分离纯化?

一个小哭包

HPLC用来分析检测，。分离纯化都是可以的。HPLC的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。

3 回答791 围观

问从细菌中提取酶，用常规的方法(超声波破壁)，总是拿不到我要的蛋白。是不是这种蛋白也是疏岁水性较强，需要加助溶剂才能提取？

天一湖医者

也可以加点甘油或者PEG来提取，但不一定会有作用。

3 回答309 围观

问蛋白17kd左右，能跟肝素亲和，现在用聚乙二醇修饰它，分子量增加5000左右，请问修饰后怎么分开修饰的和未修饰的呢？

天一湖医者

可以用凝胶色谱纯化的方法试试。

2 回答464 围观

问标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？

天一湖医者

填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。

3 回答537 围观

问蛋白挂在阳离子交换柱上洗脱不下来，怎么办？

天一湖医者

加甘油/蔗糖：增加溶液粘度，降低蛋白之间碰撞几率，从而降低聚合概率降低孵育时间：减少蛋白和填料的结合时间。

2 回答970 围观

问若转膜不完全时，下一步该怎么办？

bamboopiggy

换转膜的三明治夹子，结果不可信，没有继续往下做的必要了，当然，看看抗体是不是能用，也是可以的。

2 回答500 围观

问如果上样量超载了怎么办？

bamboopiggy

wb上样多了的话，尝试用strip buffer洗洗，或者是降低一抗，二抗的浓度。

3 回答529 围观

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