请问我的抗体针对的是膜蛋白，封闭加吐温会不会增加细胞膜的通透性，从而使我的抗体进入膜内呢？

你可以不用带tween的液体配你的封闭液啊，没事的，封闭，只要有奶粉或BSA，溶解在缓冲液中就可以

封闭加吐温个人认为表面活性剂可以防止过多的封闭蛋白形成层积效应,即多层蛋白粘附在板孔中,一般用量1/千以下!个人建议封闭液中不要加表面活性剂,实验证实表面活性剂可以增大蛋白的反应活性,但是对包被板的稳定性有很大的影响,造成稳定性降低!所以封闭液中不要加表面活性剂,可以适当的降低封闭蛋白的浓度达到封闭效果即可!

应该是不会的。在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。