实验问答21,889,066 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？

bamboopiggy

1取决于你的实验目的，细胞还是动物2.要看你要导入的是什么细胞？贴壁细胞一般，用化学转染，悬浮细胞用电转的多。生殖细胞用显微注射，动物可以用载体导入。

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问同种组织的两种细胞直接共培养

bamboopiggy

贴壁细胞一般用DMEM高糖，悬浮细胞一般用1640，两种细胞直接共培养的培养基可用DMEM高糖，因为DMEM高糖的营养成分比1640多。培养两种细胞的比例需要你做预实验确定，一般从1：1开始，当然你可以评估一下它们在组织中的分布比例。

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问想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态，是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜

bamboopiggy

这个要看你的病毒带不带荧光，，如果带荧光，可以用荧光显微镜，顺便还可以看一下转染效率

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问病毒以MOI为1接种细胞，是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积

bamboopiggy

MOI是multiplicity of infection的缩写，中文译为感染复数，一般认为MOI是一个比值，没有单位，其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109（9次方），那么1毫升病毒液中有10的9次方个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度（pfu/ml）的值，那就简单些啦（因为病毒滴度（pfu/ml）的值得出是比较麻烦的），MOI=（p

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问培养贴壁细胞，例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间，如何判断？

bamboopiggy

加入胰酶后，润湿一下细胞，然后吸出胰酶，不用吸的太干净。然后镜下观察，细胞变圆了，就可以终止胰酶消化了，容易消化的细胞大概30s-1min，不容易消化的，可以放37度数分钟，主要镜下观察形态改变

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问培养的原代卵巢颗粒细胞支原体污染如何判断？

bamboopiggy

400X看不到支原体的，检测支原体最简单的方法就是取培养液，直接进行pcr检测。

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问如何制作简易的小鼠代谢笼

天一湖医者

这个比较详细，参考一下http://www.xjishu.com/zhuanli/01/201821722968.html

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问请问如何确定药物作用于细胞的靶蛋白是什么？脂溶性很差的药物能通过细胞膜吗？

天一湖医者

.高通量筛选的方法用微量滴定之类的方法,看分子能否与已知的蛋白质结合。一般只做计算机算出来的特定蛋白质

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问植物外泌体或者细胞外囊泡如何提取蛋白质

bamboopiggy

建议你直接买个外泌体蛋白提取的试剂盒吧，都做到这么个份上了，不怕花钱补充一下：thermo有个kit，可以直接提取外泌体得RNA和蛋白质，说明如下：总外泌体 RNA 和蛋白分离试剂盒设计用于从预分离的或富集外泌体中分离 RNA 和蛋白（未提供）。其适用于 RNA 表达（具体为 miRNA）、处理或功能研究。该试剂盒能够回收相同纯化外泌体制备物中的 RNA 和蛋白。其中一部分样品经过有机提取，然后在

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问各位大神救命！帮我看看这是什么污染？应该如何防治？

bamboopiggy

感觉你还是重新提吧，这个是细胞间常见的真菌污染，感觉很难清除掉。再提的时候，注意无菌操作

3 回答340 围观

问请问小鼠AWR测定的球囊如何制作

bamboopiggy

自制结直肠扩张球囊 (简称球囊)：一次性保鲜袋用塑封机制成长2 cm，直径0.8 cm，一端封闭的圆柱形球囊，输液导管插入球囊中，导管与开口端用丝线结扎，确保密封不漏气。测量时将球囊插入小鼠肛门，深度为球囊结扎线距肛门括约肌大约0.5 cm处，用胶带轻轻将外端导管固定在小鼠尾巴上，以防球囊在实验过程中滑出。导管通过三通管一端与血压计相连，一端连接注射器。小鼠在实验前12 h禁食不禁水。将小鼠放置在

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问请问怎么研究药物作用于细胞的方式是通过膜表面受体发挥作用还是进入细胞里面的呢？

bamboopiggy

你可不可以在你的药物上加上一个示踪的蛋白，然后confocal照一下就可以。

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问脑细胞提取，如何避免污染

天一湖医者

1、从培养箱取放细胞前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前，准备好所有实验所需物品，以减少走动，物品需有序摆放在超净台触手可及的地方，同时空留足够操作空间。3、操作时，试剂不用尽量及时盖上盖子，移至操作区外围，尽量不要从开口容器上经过。

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问Fe3O4@Au核壳结构可见吸收峰怎么调控红移

未来9

纳米复合粒子粒径的增大和分散介质离子强度的增高, 可以使最大吸收峰发生红移, 并出现峰形展宽的情况.

1 回答423 围观

问纤维素、半纤维素和木质素之间有没有什么含量关系？

天一湖医者

　　没有什么关系。纤维素（cellulose）是由葡萄糖组成的大分子多糖。不溶于水及一般有机溶剂。是植物细胞壁的主要成分。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50%以上。棉花的纤维素含量接近100%，为天然的最纯纤维素来源。一般木材中，纤维素占40～50%，还有10～30%的半纤维素和20～30%的木质素。　　半纤维素(hemicellulose)：是由几种不同类型的单糖

2 回答3088 围观

问在同种质粒上插入不同基因，比较这些基因的表达量，质粒转染时按等质量算，还是按等拷贝数算呢？

bamboopiggy

因为你要比较的不同基因的表达量，所以要在同一个级别比较，需要按照拷贝数来计算，不能按照质量算了

2 回答588 围观

问制作的细胞成长曲线没有到达平台期是因什么原因？

天一湖医者

有以下原因：一是细胞接种密度过低；二是细胞培育时刻过短；三是细胞成长状况欠好，使其不能正常增殖。

2 回答723 围观

问.细胞成长曲线还有其他办法制作吗？

bamboopiggy

你可以用exel做，也可以用spss，graphpad做，都可以啊

3 回答308 围观

问HepG2细胞裸鼠成瘤

ChaunceyMu

加matrigel，这个成瘤是很慢的，需要生长20几天后才会慢慢长起来，长起来以后就跟正常肿瘤一样的生长速度了。我们用的是NSG小鼠

3 回答2959 围观

问用NBS溴代苯环上的甲基需要反应多长时间，只要溴代上就行

天一湖医者

用NBS溴代苯环上的甲基一般反应时间为5小时。

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