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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
EP凝胶的聚合缓冲液是什么?
dxywode
琼脂糖凝胶电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE,而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。
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问
悬浮细胞做转染,lip3000,6孔板每孔种多少细胞转染效率比较高,现在种15万个细胞每孔,感觉转染效率不高
dxywode
如遇转染效果不佳,可采取优化方案对实验进行优化:1. 优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。2. 同时细胞污染也是造成细胞死亡,转染效率低下的一大原因。转染细胞用的质粒必须保证无菌。分享一个小秘诀:将提完质粒后或者提的最后一步,用75%乙醇沉淀,这样就除菌了。3. 转染用的质粒首先要保证数量,一般为2μg以上。如果质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他
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问
染色体做完镜下看是实心的,像一个细的木棍
dxywode
只能是大概说一下,因为缺少图,其实你多看一些片子就会发现,做核型分析的时候,视野中出现的结构应该有分离良好的染色体,边缘很粗糙的圆形,边缘光滑的圆形大致三种类型。边缘粗糙的那种就是染色质在形成染色体的过程中。丝状的染色质盘绕在一起,是很难分开的,表现出来就是一个圆形的细胞核的样子。
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问
做qPCR必须每次要做三个生物学重复和三个技术重复吗
balalaLy
技术重复是同样的sample在一次pcr实验中重复三个复孔,你加样熟练的话也可以只做2个复孔。三次生物学重复是收三批sample
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问
qPCR实验平行的孔总是重复性很差,该怎么改进呢?加样时有推荐的先后顺序吗?
balalaLy
每个孔加的量很低,要留意一下有没有把样品都完全打出去了,枪头上有没有残留
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问
qPCR的实验数据如果有很多该怎么处理呢?数据少还能一点一点算,但是多的话,真的很头疼啊
whilt-shirt
可以做一个Excel公式模板,数据复制后就能直接得出结果
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问
巢式PCR是利用PCR的产物又进行了一次PCR吗?巢式PCR的产物在跑胶时样品不进胶是怎么回事,试过调Ph值,但是不管用
汤姆卜丽波
可能不是ph的问题,有可能是pcr产物蛋白污染了,所以在孔洞里不进胶
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问
请问各位大神,公司卖的PCR Mix真的比自己按照比例配置的PCR Mix 优秀很多吗?有没有人对比过?
汤姆卜丽波
实际来说如果自己配置的已经调试好了,那效果要比mix好一点,mix.主要是方便,减少误差
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问
请问有没有能够快速评价引物的质量以及评价一对引物是否匹配的软件或者在线网址?
balalaLy
primer/oligo/dnaman
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问
PCR实验出现假阳性的时是什么原因造成的?
whilt-shirt
模板降解、试剂过期、加样不准确都会导致
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问
培养液中病毒rna提取
天一湖医者
不同厂家的对比,可以参考一下选择。
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问
sw620形态正常吗
天一湖医者
从图片上看,这个sw620形态还是正常的。
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问
Rasa3flox/floxCD4cre是什么小鼠呀?
bamboopiggy
Rasa3flox/floxCD4cre是在cd4阳性细胞中,特异性敲除rasa3基因的小鼠。cd4 cre,代表的是cd4 阳性细胞特异性cre
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问
帕金森模型造模予腹腔注射MPTP(30mg/kg)换算成注射体积是多少 ml/10g?
天一湖医者
换算成注射体积可以乘1.44左右。如上30mg/kg,则换算为43ml/10g左右。
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问
物种与抗体免疫原同源75%,能用吗?
天一湖医者
免疫组化影响因素较多,不太好说,可以试下。
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问
请问各位实验大神,用cck8单纯的测细胞增值实验,数据怎么分析,可以直接用OD值作图吗
balalaLy
一般是以对照组的OD值为1转化为相对值进行做图
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问
红色荧光蛋白质粒转hek293t不亮怎么办
bamboopiggy
可能是你质粒构建有问题,尤其是diRed,容易产生移码,先检查质粒,如果没有问题,可以进行流式分选后,再做。
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问
近交系C57如何快速大量繁殖
bamboopiggy
怎么繁殖,超过10代,总会产生遗传漂变。如果10代以内,可以直接雌雄合笼,得到想要的鼠。
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问
我想敲掉一个基因,过表达另一个基因,是找公司给我做质粒转染进细胞么?
bamboopiggy
你想自己做也可以啊,找公司也行,看你的经费情况。
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问
设计引物时怎么保留完整的cds区
bamboopiggy
如果要保留完整的cds区,可以保护碱基+酶切位点+cds的start code开始的那一块,保护碱基+酶切位点+cds区的stop code 往前的一段,来设计引物。
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