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科研学霸天团，48小时有问必答

问请教大佬安捷伦流式仪做的细胞周期数据用Modfit分析应该选哪个通道？

huarenqiang5

每张图片建议都选第一个通道进行分析。

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问NOTCH通路

loveliufudan

Notch1-4和jag是Notch信号通路的重要组成部分，Notch信号通路在细胞发育和分化中起着重要作用。你可以使用primer bank（Primer Bank ( harvard.edu )）来查询人类基因的PCR引物序列。例如，如果你想查询Notch1的引物序列，你可以在primer bank的搜索框中输入NCBI Gene ID为4851，并选择Human作为Species，然后点击s

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问不满足HW平衡的位点处理

huarenqiang5

不足HW平衡的位点建议进行踢出。

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问跟同门师兄生信分析用了同一个公共的数据集，但是分析的内容完全不一样，会有影响吗？

huarenqiang5

如果你分析内容等方面不一样一般来说没有什么影响。最好是先进行查重看看，如果达标就没问题。

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问流式区分死活细胞

loveliufudan

DAPI和PI都是DNA染料，可以用来区分死活细胞。死细胞的质膜完整性受损，导致DNA染料可以进入细胞核并与DNA结合，发出荧光信号。活细胞的质膜完整性正常，阻止DNA染料进入细胞核，因此不会发出荧光信号。如果你想用DAP或PI区分死活细胞，你应该先进行固定再进行染色。如果你先染色再固定，会导致所有的细胞都发生渗透性增高，结果就是所有的细胞都染上色以至于无法区分死活细胞。如果你需要检测胞内抗原而不

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问家人们帮忙看看这GSEA报错什么意思

汤姆卜丽波

你看下你的矩阵表格，有芯片参数或者说命名不对

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问请问污泥中的酸性磷酸酶可以提纯吗

dxy_5kz0zll2

污泥中的酸性磷酸酶可以提纯的。

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问想请教一下各位前辈，做癌细胞靶向耐药相关实验，为什么逆转剂用的浓度是IC10呢，可以用IC50吗

土井挞克树

不建议，因为后续计算逆转倍数时，逆转倍数是ic50/ic50，分子为不加逆转剂的浓度。所以在逆转剂的浓度一般用ic10

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问如何查找某个基因的基因沉默序列腺病毒？

huarenqiang5

基因沉默分为转录水平的沉默（TGS）和转录后水平的沉默（PTGS）。TGS是指转基因在细胞核内RNA合成受到了阻止而导致基因沉默;对于部分植物来说,转基因引发的基因沉默可能是因为基因特异的甲基化而导致;PTGS则是指转基因能够在细胞核里被稳定地转录,但在细胞质里却无相应的mRNA存在这一现象。RNAi、共抑制、 quelling均属于PTGS。病毒基因、人工转

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问如何在液相或干燥的环境中保持酶活性

上山打老虎11111

如果环境不可控，可加些酶稳定剂如海藻糖等

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问甲醛滴定法测定蛋白质水解度？

huarenqiang5

下面标注的有，n0是水解前每克蛋白游离的氨基酸毫摩尔数（mmol/g）。

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问2，4-D生长素配成培养基的母液的时候，使用少量酒精可以溶解，但是加入蒸馏水后会有晶体析出，这是为什么呢？

sswei

可能温度发生改变或可能含有机物质。

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问求问t载体连接转化后，涂板，为什么会出现这种情况？培养基加了氨苄了。

土井挞克树

还是有污染，增加一种抗生素试一试

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问基因在细胞表达的位置如何确定？

huarenqiang5

如果你有这个基因序列，就可以直接ncbi里面blast比对，有匹配的基因。如果只有基因名称，那么基因出处应该有。基因在哪个部位表达，如果是亚细胞定位，可以使用预测软件，输入蛋白序列就可以进行预测，一般用的wolf-sport。其他的在线预测软件网上搜一下也可以找到。

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问油红O染色的阳标怎么加到培养基里

sswei

油酸不溶于水，要先跟NaOH反应生成油酸钠，然后加入到培养基中。也可以用乙醇之类的有机溶剂溶解油酸，然后加入到培养基中，但是一般乙醇等有机溶剂的终浓度要小于1％，甚至0.1％，所以要配置成高浓度的有机溶液。

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问PCR产物双酶切构建载体，为啥很多假阳性？？？

huarenqiang5

主要考虑以下几点原因：1、模板：①模板中含有杂蛋白质； ②模板中含有Taq酶抑制剂； ③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白； ④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚； ⑤模板核酸变性不彻底。2、酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使

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问请问大佬们，这个缓冲液怎么配置

路人假5JB3

您好，请问您这个缓冲液是PEB吗？

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问农杆菌摇菌需要多久，谢谢

huarenqiang5

150-200都可以时间大概是12-18小时就可以达到OD600=1.0，如果用于转化建议OD在0.8以下。

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问小鼠杂交瘤细胞复苏和传代不理想，细胞难贴壁，易漂

loveliufudan

杂交瘤细胞的汇合度可以受到许多因素的影响，如细胞密度、细胞健康状态、培养条件等。在复苏过程中，细胞因保存不当可能受到了一些损伤，导致汇合度不高。此外，液体的更换也可能会对细胞产生一些影响，需要注意消毒和洗涤过程中的操作。在这种情况下，您可以尝试更改培养条件或使用不同的培养基来促进细胞生长和汇合。例如，可以尝试使用包含更多生长因子或血清的培养基，或者调整细胞密度和接种密度。此外，确保培养条件的恒定和

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问基因敲除/敲入如何验证

juyue2010

提基因组，在基因插入位置两侧，设计引物，扩增跑胶

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