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PCR常见问题的精辟总结--耶鲁大学

Troubleshooting for PCR and multiplex PCR Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles. COMPONENTVOLUMEFINA ...

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建立理想的人类恶性肿瘤(肺癌、肝癌)的可移植实验动物肿瘤模型

目前现代肿瘤基础生命科学研究与现代肿瘤治疗医学科学研究,应用的最广最有实用价值的可移植实验动物肿瘤模型、与人类肿瘤的可移植实验动物(裸鼠)肿瘤模型,普遍存在着肿瘤生长速度快、增殖比高、体积倍增时间短、肿瘤生命性质简单,与人类肿瘤具有明显不同;特别是与人类的致死性实体恶性肿瘤生命性质、与生长发生机制差异更大。那些肿瘤生命性质简单的可移植实验动物肿瘤模型、与人类肿瘤的可移植实验动物(裸鼠)肿瘤模型,仅 ...

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肿瘤模型的复制方法

复制动物肿瘤的方法很多,如将实验动物用放射线照射或静脉、局部注射放射性同位素;使用各种化学致癌剂(烷化剂、多环芳香烃类、芳香胺类、氨基偶氮染料、亚硝胺类);使用植物毒素(如苏铁素、黄樟素等);使用金属(如铬、镍、砷、镉等);使用RNA和DNA肿瘤病毒;使用多种致癌性霉菌毒素(其中致癌作用最强者为黄曲霉素)等,均可诱发成各种肿瘤。 诱发性肿瘤模型其数量在诱发性动物模型中占首位。一般是利用致癌物质通过 ...

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基因打靶技术的新进展

一、条件性打靶 条件性基因打靶(conditional gene targeting)可定义为将某个基因的修饰限制于小鼠某些特定类型的细胞或发育的某一特定阶段的一种特殊的基因打靶方法。它实际上是在常规的基因打靶的基础上,利用重组酶介导的位点特异性重组技术,在对小鼠基因修饰的时空范围上设置一个可调控的“按钮”,从而使对小鼠基因组的修饰的范围和时间处于一种可控状态。利用Cre/ ...

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豚鼠生物学特性和解剖生理特点

1、豚鼠属哺乳纲,啮齿目,豚鼠科。又名天竺鼠、海猪、荷兰猪。 2、喜群居,头大,颈短、耳圆、无尾,全身被毛,四肢较短,前肢有四趾,后肢有三趾,有尖锐短瓜,有抓人,不喜于攀登和跳跃,故可放无盖小水泥池中进行饲养。习性温顺,胆小易惊,有时发出吱吱的尖叫声,喜干燥清洁的生活环境。 3、嗅觉、听觉较发达,对各种刺激均有极高的反应,如对音响、嗅味和气温突变等均极敏感,故在空气混浊和寒冷环境中易发生肺炎,并引 ...

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荷兰猪疾病的防治

(一)养荷兰猪应该有一套科学的防疫程序,做到预防为主,综合防治: 1、搞好卫生,严格消毒 相信大家对勤换垫材(木屑)、及时清理粪便这些工作都做得不错吧,但看不见的病原微生物才是荷兰猪真正的大敌!所以,家里除了准备必要的兽药的同时,消毒药物更是不可或缺的,从药店可以买到“高锰酸钾”或“新洁尔灭”按说明书稀释成需要浓度,每周至少消毒两次,这两种药物应该交 ...

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豚鼠主要品种和品系

1、近交品系豚鼠目前世界上有12个。由于豚鼠妊娠期较长为68(62~72)天,一胎生得少,一般2~3只,培育一个近交品系需要20~30年,所以近交品系较少。用于医学科研的近交品系纯系2号和纯系13号。 (1)近交系2:此品系1906年引自美国农业部,在1951年11代时,Wright采用兄妹交配繁殖到1933年的33代后,改为随机交配,一直到1940年。1940年Heston继续采用兄弟交配。19 ...

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荷兰猪

荷兰猪:别名彩豚、海猪。又叫荷兰猪、豚鼠、荷兰鼠、彩豚、天竺鼠,全黑的又叫黑豚,它是珍贵的皮肉兼用的草食动物。英文名:guinea pig 。 荷兰猪成年体重1~1.5kg,体长20~30cm,皮毛紧披,富有光泽,用它的皮毛经加工可制作上等的裘皮服装、披肩、手套,皮帽。 原产地是南美洲秘鲁一带,天然食物是青草,植物的根以及果实种子,是绝对的素食主义者。野生的荷兰猪身材苗条运动灵活,长期被人类当作宠 ...

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PCR常见问题

PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有模板核酸的制备,引物的质量与特异性,酶的质量及,PCR循环条件。 寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Taq酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。 ...

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PCR产物量小或没有目的产物

Possible Causes: Components · Primer concentration is too low. · Primer concentrations not balanced. Make sure primers arepresent in equal concentrations. · New primers are requir ...

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PCR产物的克隆

PCR产物克隆大致分为两类,即平头连接和粘头连接。 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性)。如果要求不高,PCR产物也可不加处理。如果使用 ...

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PCR产物的电泳检测时间

一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有1、模板核酸的制备2、引物的质量与特异性3、酶的质量及4、PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:1、模板中含有杂蛋白质2、模板中含有Taq酶抑制3、模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白4、在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚5、模板核酸变性不 ...

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颞叶癫痫模型的建立及其相关研究

颞叶癫痫模型的建立及其相关研究 杨忠旭1 栾国明2 张颖3 (1首都医科大学北京天坛医院神经外科,北京100050; 2卫生部北京医院神经外科,北京100730; 3北京市神经外科研究所,北京100050) 摘要 目的 通过立体定向手术建立大鼠颞叶癫痫模型,并对模型的电生理和永久癫痫敏感性的病理学基础进行研究。方法 按公斤体重计算的海仁酸立体定向手术一次性注入大鼠的海马组织,于术后不同时间观察大鼠 ...

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压条法育苗

压条法是使大树上某部分枝条生根后离开母株的繁殖方法。 (一)水平压条 可利用1—2年生多余的枝条,也可用当年生的新梢或副梢进行压条育苗。用1年生成熟枝条压条育苗,在头一年冬剪时,留下母株基部附近的萌蘖枝,翌春萌芽前进行压条。首先在准备压条的植株附近挖一深10一15厘米的沟,沟底施肥、深翻,使土壤疏松。然后将留用压条的枝条下部刻伤处理后,水平压在沟底,并用木权或铁钩固定后, ...

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葡萄不催根扦插

春季将贮藏的枝条从沟中取出后,先在室内用清水浸泡6—8小时,然后进行剪截。一般把枝条分别剪成有2—3芽的插条。插条一般长20厘米左右,节间长的品种每个插条上只留1—2个芽。剪插条时上端在芽上部l厘米处平剪,下端在芽的下面斜剪,剪口呈“马耳状”(剪口距芽眼近时易生根)。插条上部的芽眼要充实饱满,扦插后如第一芽眼受损害,第二芽眼即可萌发,这鲜 ...

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秋海棠组培快繁

一、植物 竹节秋海棠(B.President-carnot) 二、材料类别 叶片、叶柄、茎段 三、培养条件 以MS为基本培养基。诱导愈伤组织培养基:(1)MS+BA3——5mg/L(单位下同)+NAA0.1——0.5。丛生芽增殖培养基。(2)MS+BA1.0+NAA0.1。(3)MS十BA0.5十NAA0.1。(4)壮苗培养基: ...

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火鹤试管苗移栽

一、材料 试验材料为经增殖培养(MS+6-BA0.2+IBA0.1+糖3%)和生根培养(1/2MS+6-BA0.15%+糖2%)的试管苗。苗高3cm以上,具有3片以上完全叶。 二、方法 (一)培育壮苗 将经生根培养40d后的幼苗,转移到壮苗培养基上,培养基配方为1/2MS+6-BA0.05 +IBA0.2+糖2.5%,给以2000——25001x的光照每天12小 ...

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鹤望兰分株繁殖

鹤望兰又名天堂鸟,为市场紧俏名贵切花。分株法是鹤望兰的最佳繁殖法。 一、母株的选择。母株应选分蘖多、叶片整齐;无病虫害的健壮成年植株。用于整株挖起分株的母株一般选择生长3年以上的具有4个以上芽、总叶片数不少16枚的植株。分株后用于盆栽的可选择有较多带根分蘖苗的植株。 二、分株时间。无论是栽植于大棚内的。还是大田苗用于盆栽的。适宜时间均为5—6月份。 三、分株方法。 1、不保留母株分株法 ...

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种胚嫁接

水稻、小麦、高粱、玉米等禾本科植物,没有形成层,无法使用一般嫁接方法,须用种胚嫁接法进行嫁接。种胚嫁接法是将一个禾本科植物的胚切下来作接穗,嫁接到另一禾本科植物的胚乳(砧木)上,使其萌发生长成1株嫁接苗。种胚嫁接法的方法步骤如下。 浸种 将用作接穗和砧木的种子,同时放入清水中浸种半天,使种子吸水膨胀。浸种时间不能过长,否则会使胚乳变软而不易切胚。 催芽 将浸种后的种子放入培养皿中的湿滤纸上,置于2 ...

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靠接

靠接是特殊形式的枝接。其方法步骤如下。 (1)使接穗和砧木靠近。嫁接前,应将接穗、砧木中的一方,种植于花盆中(或二者均种植于花盆中)。嫁接时,按嫁接要求将二者靠拢在一起,作好嫁接准备。 (2)削接穗和砧木。选择粗细相当的接穗和砧木,并选择二者靠接部位。然后将接穗和砧木分别朝结合方向弯曲,各自形成“弓背”形状。用利刀在弓背上分别削1个长椭圆形平面,削面长3~5厘米,削切深度为 ...

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