全部

一、实时荧光Taqman 探针设计总原则：探针选择要保守，引物选择要保守，因此必须找一段100-200bp相对要保守的片段来设计引物与探针。即real-time PCR的扩增片段是50bp----150bp。当找不到150bp的保守片段时，必须确保探针的片段是保守的。在设计探针和引物时，要同时考虑在两条链上设计引物与探针。但要注意的是：在那条链上设计探针时，就应靠近在同一条链上设计的引物(即上游引 ...

要跑琼脂糖凝胶电泳， 5ng 就能很清楚的跑出来是这样吗？能够照相的清楚的条带，至少需要多少量呢？ 参考见解：5ng 已经可以了，但是或许20ng50ng-200ng效果好，在此范围内呈线性。 把210bp的pcr产物进行酶切得到190+20bp的两个片段请问能用琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果吗?用多大浓度的胶和多大的电压呢? 参考见解：可以用琼脂糖凝胶电泳分开电压不变可用1.5%到2%的胶20bp得 ...

影响电泳分离的主要因素： 1. 待分离生物大分子的性质：待分离生物大分子所带的电荷、分子大小和性质都会对电泳有明显影响。一般来说， 子带的电荷量越大、直径越小、形状越接近球形，则其电泳迁移速度越快。 2. 缓冲液的性质：缓冲液的pH值会影响待分离生物大分子的解离程度，从而对其带电性质产生影响，溶液pH值距离其等电点愈远，其所带净电荷量就越大，电泳的速度也就越大，尤其对于蛋白质等两性分子，缓冲液pH ...

（一）第一向等电聚焦 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的IPG预制胶条（17cm pH 4-7），室 ...

凋亡细胞核DNA片段检测方法进展.pdf ...

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，使外源基因随外壳蛋白的表达而表达，同时外源蛋白随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术。到目前为止，人们已开发出了单链丝状噬菌体展示系统、λ噬菌体展示系统、T4噬菌体展示系统等数种噬菌体展示系统。本文主要概述了噬菌体展示技术的基本原理、噬菌体展示系统研究以及技术特点等，并跟踪了目前该领域的最新研 ...

影响双向电泳分离效果的若干实验条件比较研究.pdf ...

高效毛细管电泳（high performance capillaryelectrophoresis，HPCE）是近年来发展起来的一种分离、分析技术，它是凝胶电泳技术的发展，是高效液相色谱分析的补充。该技术可分析的成分小至有机离子、大至生物大分子如蛋白质、核酸等。可用于分析多种体液样本如血清或血浆、尿、脑脊液及唾液等，HPLC分析高效、快速、微量。 电泳迁移 不同分子所带电荷性质、多少不同，形状、大 ...

与许多一次做数百块Southern blots的研究人员一样，我第一次用PCR做基因分型（genotyping）时觉得见效很快，不再需要等几天才能看到结果，不再需 要DNA显微图像或者操作紫外线了。随着技术的不断进步，RCR使基因组学和转录组学发生了翻天覆地的变化，甚至随着免疫PCR的普及开始进军蛋白组学。 目前有许多以RNA为基础的基因分型技术，有些只是名称不同，简单到只是跑块胶，有些很复杂，需 ...

摘要　目的：建立人类血小板抗原1～4系统序列特异性引物（PCR-SSP）分型方法。方法：合成14条引物，采用PCR-SSP方法对25名健康献血者的HPA-1～4系统进行基因分型；分型结果与采用等位基因特异性寡核苷酸点杂交（PCR-ASO）获得的结果进行比较。结果：以PCR-SSP方法对HPA 4个系统进行分型均取得了明确、满意的结果，且与PCR-ASO方法获得的结果完全一致。结论：人类血小板抗原P ...

单核苷酸多态性基因分型系统.pdf ...

1.Wash adherent cells twice in the dish or flask with ice-cold PBS and drain off PBS.Wash non-adherent cells in PBS and centrifuge at 800 to 1000 rpm in a table-top centrifuge for 5 minutes to pellet ...

Buffers: Lysis Buffer (1 liter) 50 mM NaH2PO4 6.90g NaH2PO4.H2O (MW 137.99g/mol ) 300 mM NaCl(up to 2M)17.54gNaCl(MW 58.44)or 60ml 5M 10 ...

Swelling and Storage 1.Resuspend .2 gm of beads (= 1.0 ml swelled bead volume)in 40 ml of distilled water.Let swell for at least 2 hours. 2.Wash beads twice in (10 ml each wash).Spin in clinical or ta ...

GST Protein Prep. Ver.2 1) Grow 50ml of culture in LB or TB +antibiotic o/n at 37_C shaker. 2) Dilute culture in LB or TB +antibiotic 1:10 3 ...

Hancock Laboratory ，Department of Microbiology and ImmunologyUniversity of British ColumbiaBritish ColumbiaCanada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/methods/PROTEINASSAY.htm (Sandermann and Stromiger.1972.J. ...

结晶紫法活性测定 1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞，用0.25%胰酶（以无钙镁离子PBS溶液配制，pH7.4）消化后，加入RPMI-1640培养基（10%新生牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，pH7.2）吹打细胞，使形成细胞悬液。进行细胞计数，使细胞数为2~2.5×105个/ml。接种于96孔细胞培养板，100µl/孔。接种细胞时须不断摇动细胞悬 ...

(一)蛋白质电泳 1.请参照常规电泳操作. 2.分子量标准: 可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时要注意其优点和缺点: 优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率. 缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力. 购买信息: 中范 ...

在原核蛋白表达过程中，选择构建一个合适原核表达体系需要综合考虑3大因素：表达载体、宿主菌株、表达诱导条件以获得最满意的表达效果。事实上，在平时的实验中，最容易被忽视的就是宿主菌的选择――多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因――即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。 作为原核表达的宿主，对外源基因的表达会产生一定的 ...

T7Select™ 噬菌体展示系统是Novagen开发的基于T7噬菌体(而非传统的M13)创新的基因发现研究产品。目的序列(C-端)与T7基因10 衣壳蛋白而表达得到的多肽和蛋白即可暴露(展示)与病毒(T7噬菌体)的表面。复制周期短，细胞质蛋白组装，操作和储存方便，超高克隆效率，以及T7噬菌体强大的天然特性使Novagen的T7Select成为替代传统M13系统的更好选择，用于高效文库 ...