全部

无菌操作技术 体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室，若实验者粗心大意，技术操作不规范也会导致污染。因而为在一切操作中最大可能地保证无菌，每一项工作都必须做到有条不紊和完全可靠。 Terms to remember 消毒(disinfection)和消毒剂(disinfectant) 灭菌(sterilization) 防腐(antis ...

韩雪梅证实“小黑焦虫”为硅的化合物 我院肿瘤研究室韩雪梅副研究员领导的科研小组，利用多学科先进技术和方法，经过几年研究，在国内外首次证实，目前广泛影响细胞培养的污染物“小黑焦虫”，乃是一种非生命物质——硅的化合物，并初步提出了解决这一问题的方法。参加成果鉴定会的专家们一致认为，这一发现是我国细胞培养工作史中的重大突破，为组织培 ...

Marc 145细胞培养和维持有关资料综述 一、 细胞及培养 1、Marc145细胞 上皮样细胞，来源于猴肾细胞，从母细胞（MA 104细胞）克隆而得到，可连续培养。 2、生长培养基 DMEM（高糖型，含4500mg/L D－葡萄糖、L-谷氨酰胺，和110mg/L丙酮酸钠，不含碳酸氢钠）＋5－10％新生牛血清+ 1%双抗（青霉素和链霉素）的培养液。 3、冻存液 生长培养基＋10% DMSO 4、细 ...

HepG2细胞培养的相关条件 HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒培养等方面的研究研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性，还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌细胞培养的最佳条件做一简单综述。 1.HepG2细胞的复苏条件 1.1 复苏温度的选择 唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏：快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解，溶解 ...

足细胞来源： 丁香园网友yulinlong的观点为： 很多细胞中心就有卖的，或者有的公司可以代理ATCC公司的就可以。 有的文献用的永生化细胞系是他们自己建的系或者别人建系赠予的，你也可以考虑向国内或者国外去请求馈赠。有的会给的。 丁香园网友wenyueqiang的观点为： 美国爱因斯坦大学的PETER MUNDEL有 足细胞培养方法： 大鼠原代足细胞： 丁香园网友gaoxueyan99的观点为： ...

Q：准备用FITC，PE和APC进行三标，检测三标细胞占待检测细胞的百分比。预实验摸抗体浓度时，用单标管与相应的同型对照管比较，在二维散点图上，发现部分指标除在检测通道上偏移，在无关通道上散点也有偏移，我想这就应该是补偿需要做的事情了吧。根据预实验的结果，我发现荧光的部分干扰现象，如PE检测影响APC和FITC，FITC影响APC，而APC不影响PE和FITC等。我的问题：1，很奇怪的是FITC和 ...

血小板在各种诱导剂作用下释放其颗粒内容物，产生生物学效应，在初期止血过程中发生粘附-变形-释放-聚集等反应，这些血小板的基本反应，统称为血小板活化反应。血小板活化的检测对血小板相关疾病的诊断有重要价值。然而，检测的方法常常是有争议的，通常是由于方法本身不完善或应用不当导致医源性血小板激活，影响临床诊断的价值。这就要求建立一种灵敏、精确、快速、简便，最好可用于临床常规检测血小板活化的方法。近几年来， ...

Fluo-3-Am为一新型的高度特异性Ca2+荧光指示剂，可以灵敏地反映细胞内游离钙离子浓度的变化， Fluo-3-Am进入细胞后经非特异性酯酶脱去Am酯，成为脂溶的Fluo-3留在细胞内，当Fluo-3与细胞内游离 钙结合后，其荧光强度是Fluo-3本身的40倍以上，当用480nm波长激发时，其荧光强度与游离钙离子 浓度成正比.具体如下，① 钙荧光探针负载；取细胞悬液，加Fluo-3-Am至 ...

钙离子是机体的重要元素，同时作为细胞内第二信使通过与钙调蛋白（Calmodulin，CaM）结合激活多种蛋白激酶（如腺苷酸环化酶、磷酸二酯酶、钙调蛋白激酶等）及诸多蛋白水解酶和核酸酶，从而参与包括细胞代谢、细胞周期等多种细胞功能的调节，在细胞的许多生命活动中担当着重要的角色。因此，钙离子测定在医学实验研究中有着重要意义。 　　钙离子测定技术得益于两种近代实验技术，一是钙激活蛋白及荧光指示剂（或称荧 ...

由于可溶性MHC单体分子与TCR的亲和力很低，解离快，而多价分子可与一个特异性T细胞上的多个TCR结合，使其解离速度大大减慢。为此Altman等提出借助生物素—亲和素级联反应放大原理构建MHC I类分子四聚体。该方法通过基因工程技术把长度为15个氨基酸残基的生物素酶底物肽(Bio A substrate peptide，BSP)加在MHCI类分子如HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白， ...

细胞凋亡的检测方法，从大类上还可以分为早期检测、晚期检测和mRNA水平的检测。1． 早期检测: 1） PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测2）细胞内氧化还原状态改变的检测3）细胞色素C的定位检测4） 线粒体膜电位变化的检测 2． 晚期检测：1） TUNEL2） LM-PCR Ladder （连接介导的PCR检测）　　当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观 ...

线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。　　线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol c ...

（１）定期对过滤器、水箱、脱泡槽彻底清洗； （２）镜片表面有污物时，先用吸耳球将光学镜片上微细毛尘清除；必要时用镜头纸或少许无水酒精轻轻擦拭； （３）光源、亮度不足时，应更换新光源； （４）每月必须用标准液分档标定一次； （５）经常检查零点和满度的漂移，超差时应调整或修理； （６）按说明书要求安排仪器的工作环境。 ...

（一） 测原理 细胞发生凋亡时，其细胞膜的通透性也增加，但其程度介于正常细胞和坏死细胞之间。利用这一特点，被检测细胞悬液用荧光素染色，利用流式细胞仪测量细胞悬液中荧光强度来区分正常细胞、坏死细胞和凋亡细胞。 （二） 用价值 流式细胞仪检测有下列特点：（1）检测的细胞数量大，因此其反映群体细胞的凋亡状态比较准确；（2）可用许多相关分析；（3）结合被测细胞DNA含量分析，可确定凋亡的细胞 ...

【原理】 以醋酸纤维薄膜为支持物，用缓冲液润湿后，将微量血清样品点于膜上，再在电泳槽中进行电泳，可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带，将薄膜置于染色液中，使蛋白质固定并染色后，可看到清晰色带，也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定，再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。 在正常情况下，这些蛋白质各占一定的 ...

实验目的:掌握Southern blotting的原理及操作步骤 实验原理: 1. 转膜的方式: 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向两张膜转移 电转移 真空转移 2. 固相支持物的种类及选择: 硝酸纤维素膜:非共价结合易脆易丢失DNA< 500 bp的DNA无效转膜前的工 ...

实验原理：基本同Southern Blotting，但因RNA是单链分子，必须消除局部区域形成的二级结构，在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小，因而需使用变性胶进行电泳；操作过程中应特别注意防止RNA的降解。 实验材料：经检测质量好的RNA样品 实验步骤： 1.制胶： Agarose&nbs ...

a.TBE浓溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。以往都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮存液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。 b.碱性电泳缓冲液应现用现配。 c.Tris-甘氨酸缓冲液用于SDS- ...

单细胞凝胶电泳（single-cell gel eiectrophoresis，SCGE）又称慧星试验（comet assay）是一项较新的电泳方法。自1978年被Rydcbert B。等人成功地用于检验DNA单链断裂以来，经过不断的改进，已成为一种快速、灵敏、简便的检测DNA损伤的方法，广泛地应用于DNA放射损伤、DNA剪切损伤、DNA交联的检测、药物的遗传毒性评价、细胞凋亡鉴定等工作中。&nb ...

可溶性抗原与相应抗体以合适的比例发生特异反应时，在一定温度和电解质存在的条件下，经过一定的时间，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的抗原可以是多糖、蛋白质、脂类等。 根据抗原与抗体的不同条件及其它因素，沉淀反应可以分为以下三种主要形式。即：环状沉淀反应(ring precipitation reaction)，凝胶中沉淀反应(precipitation reaction ...