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TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液分为水相和有机相,RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中间层可回收DNA;用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。 TRIzol试剂可用于小量样品(50-100mg组织、5×106细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107细胞)。对人,动物,植物组织,细菌均适用,可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern Blot,dot blot,ployA筛选,体外翻译,RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内,建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品,避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准,比较不同样品RNA的得

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DEAE-离子交换剂纯化血清IgG

(一)原理 离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离,而后流经固定相,使之与固定相上的可解离基团进行离子交换,吸附于固定相上,凡不能进行交换吸附的成分,则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度的差别,运用不同的pH值或不同盐浓度的溶液作流动相,流过层析柱将各组分分别再交换洗脱下 ...

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7400型高温高压流变仪

7400型流变仪是专门用于在高温高压测量完井液,钻井液等液体流变性能的仪器。最高压力可达138 兆帕(2000P S I ),最高温度可达232摄氏度(450 F )。7400的设计来于经过实践验证的高温高压技术。设计特点强调使用过程中等可靠性和安全性。 7400能够测量所有牛顿液和非牛顿液体,包括剪切相关和时间相关的液体。该仪器适合于各种类型的流体如B I N G H A M ,P S U E ...

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盐度计使用

1、特性 _独立电极,容易操作。 _小巧的机器能提供快捷,准确的数字读数,且独立探头,使测量更方便。 _测量范围:0到10%含盐量(重量百份比)。 _液晶显示不仅电池消耗量低,而且即使在强光的环境下也能清晰显示读数,方便使用。 _探头自动温度调节。 _防水面版。 _所有按键都使用橡胶按钮,防止腐蚀。 _数据保持功能。 _仪器使用耐用持久的材料,外壳也是使用了结实且轻巧的ABS塑料 ...

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Optical Imaging Techniques in Cell Biology

Publisher: CRCNumber Of Pages: 288Publication Date: 2006-11-06Sales Rank: 797631ISBN / ASIN: 0849339197EAN: 9780849339196Binding: HardcoverManufacturer: CRCStudio: CRCAverage Rating: Total Reviews: B ...

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盐析法纯化免疫球蛋白

(一) 原理 蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。当用中性盐加入蛋白质溶液中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变蛋白质表面电荷大量被中和更加导致蛋白溶解度降低使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 (二) 主要材料 ...

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蛋白质纯化的方法选择

随着分子生物学的发展,越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术,并研制成套试剂盒,使基因克隆表达变得越来越容易lIl。但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的,分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物,以研究其生物学作用,或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。相对与上游工作来说,分子克隆的下游工作显得更难,蛋白纯化工作非常复杂,除了要保证纯度外,蛋白产品还必须保持其生物学活性。纯化工 ...

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蛋白质纯化与结晶的原理

获得蛋白质的晶体结构的第一个瓶颈,就是制备大量纯化的蛋白质(>10mg),其浓度通常在10mg/ml 以上,并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术,将特定基因以选殖(clone)的方式嵌入表现载(expressionvector)内,此一载体通常具有易于调控的特性。之后再将带有特定基因的载体送入可快速生长的菌体中,如大肠杆菌(Escherichia coli),在菌体快速生长的同 ...

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电泳切胶小窍门

电泳切胶注意事项: 1.电泳的buffer和gel都是新制的,切胶的台子清理干净,刀片最好洗净灭菌,总之一句话就是保证切下的带没有外源dna污染。 2.切胶是要把整个目的片断所在位置的胶全部回收。为了减少胶的体积,可以用相对比较薄的胶来做,只要够点样即可,也可采用薄而宽的梳子来跑胶。 3.关于防护,在一般有机玻璃后就足够了,戴上防护面具以保护眼睛,如果你戴树脂眼镜就可以了。要是非常害怕紫外照射 ...

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Abbreviations

ACDP Advisory Committee on Dangerous Pathogens BSA Bovine Serum albumin BSE Bovine spongiform encephalopathy BVDV Bovine viral diarrhoea virus FBS Fetal bovine serum EC European Community ECACC ...

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Cell Culture Protocols

1.Basic Techniques - The “Do’s and Don'ts” of Cell Culture Given below are a few of the essential "do’s and don’ts" of cell culture. Some of these are mandatory ...

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Alternative Cell Culture Systems

1.Cell Culture Scale-up Systems Most tissue culture is performed on a small scale where relatively small numbers of cells are required for experiments. At this scale cells are usually grown in T flask ...

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Authentication of Cell Lines

1.Authentication Techniques Whatever the scope of work to be carried out it is important to know that the work is being conducted using the correct reagents. This is no less important for cell culture ...

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Quality Control Considerations

Introduction Quality is important in all aspects of tissue culture since the quality of materials used i.e. media and other reagents) will affect the quality of the cultures and products derived from ...

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Good Cell Banking Practices

It is bad practice to maintain a cell line in continuous or extended culture for the following reasons:~undefined Risk of microbial contamination ~undefinedLoss of characteristics of interest (i.e. surface antigen or ...

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Cryopreservation and Storage of Cell Lines

1.Cryopreservation of Cell Lines The aim of cryopreservation is to enable stocks of cells to be stored to prevent the need to have all cell lines in culture at all times. It is invaluable when dealing ...

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The Cell Environment (including types of culture medium)

In general terms cultured cells require a sterile environment and a supply of nutrients for growth. In addition the culture environment should be stable in terms of pH and temperature. Over the last t ...

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Main Types of Cell Culture

1.Primary Cultures Primary cultures are derived directly from excised normal animal tissue and cultured either as an explant culture or following dissociation into a single cell suspension by enzyme d ...

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Purifying Large E. coli Restriction Fragments from Pulsed-Field Gels

Purifying Large E. coli Restriction Fragments from Pulsed-Field Gels DNA Preparation E. coli chromosomal DNA is prepared following the method of Heath et al. ( J. Bacteriol. 174 1992). Cells ...

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Sourcing of Cell Lines

Large numbers of cell lines look identical. Cell lines with very different origins and biological characteristics typically cannot be separated on grounds of morphology or culture characteristics. Inf ...

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