0 128);"Culture bacteria1. Grow glycerol stock A13 (TBP-GST in BL21) in 10mL LB and 10ul ampicillin (1:1000)2. Shake @ 37C ON 0 128);"Induce bacteria3. Adjust culture with LB until ON culture OD is ...
1. Treat cells. For PC12 or NIH 3T3 cells a moderately confluent 60 mm plate is used. 2. Aspirate media. Rinse cells with PBS aspirate. 3. Lyse cells in 200 uL of ...
SJF 4/001) Run gel (in 1:10 running/transfer buffer(10x) and H2O for a total of 1litre) at 150 volts until leading bromophenol blue band is nearing the bottom edge of the glass plates or according to ...
(All steps with agitation unless done O/N at 4oC) Rinse membrane once in TBS-TBlock the membrane with TBS-T/ 5% milk (or HIHS) for 30 min roomtemp (can be left at 4oC O/N here) Rinse membrane briefly ...
(一)原理 将放射性元素标记的抗体(或抗原)与相应的抗原(或抗体)沉淀时沉淀线通过自显影而证实。所谓自显影就是通过复合物中的标记同位素在蜕变过程中放出的射线作用于感光材料的卤化银晶体而产生潜影再经过显影把“像”显示出来。这样能检出肉眼看不见的沉淀线从而提高反应的敏感性这种方法可应用于凝胶中的所有反应。 (二)材料 1、放射性同位素标记的抗原或抗体 2、X—射线胶 ...
1、基本原理所谓平衡饱和，是指抗原和抗体反应达到再不结合，也不解离的平衡状态，称为饱和状态，即平衡饱和。所以，有人称此为饱和分析法。这意味着抗原或被测抗原、标记抗原、抗体三者一起温育。 2、加样程序一般先加标准物或被测样品，再加抗血清，最后加标记物。这样的顺序是让标准物或被测物与抗体有短暂的结合，提高抗原的竞争抑制能力。 在小分子半抗原的放射免疫分析中，标记抗原和未标记抗原与抗体结合的亲合力常常是 ...
工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一，为了在操作过程中确保安全，有许多严格的规定和要求。虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的，但这些预防措施必须严格遵守。现对从事这一工作的一些原则作一简述，多半是一些普通的常识，但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果。 一、放射免疫实验室中的放射性危险 对于没有封闭的放射性物质，主要的危险有下面三种： （1）β-或&gamma ...
1、标记物在RIA中核素标记抗原，在IRMA中核素标记抗体。抗原有不同种类，根据其化学结构，标记时需用不同的核素和不同的方法。抗体为蛋白质，有利于碘化标记，不同抗体标记方法基本相同。标记抗体的比活度高，提高了分析的灵敏度。 2、反应速率反应速度与反应物的浓度呈正比，在IRMA中标记抗体是过量的，而且不存在竞争性结合复杂的反应，所以反应速度较RIA快。在RIA中抗体量是微量的，所以一定要用高亲和力的 ...
放射免疫分析是由Yalow和Berson于1960年创建的标记免疫分析技术。由于标记物放射性核素的检测灵敏性，本法的灵敏度高达ng甚至pg水平。测定的准确性良好，ng量的回收率接近100％。本法特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的定量测定。 一、基本原理 放射免疫分析的基本原理是标记抗原（Aundefined）和非标记抗原（Ag）对特异性抗体（Ab）的竞争结合反应。它的反应式为：http：//www.39kf.c ...
Steve Hahn last modified Mon Mar 22 1999Western Blot Probing by ECL1. After electroblotting of protein gel to immobilon membrane (See 0 128);"Novex NuPAGE method) mark the side of the membrane not in ...
0 128);"Buffers: 0 128);"TBS: 25 ml of 1 M Tris-7.5 30 ml of 5 M NaCl bring volume up to 1000 ml with ddwater 0 128);"TBS-T: TBS + 0.5 ml of Tween 20 0 128);"5X SDS-PAGE running buffer:&n ...
Semi-dry Transfer Apparatus Biorad Cat# 170-3940 or equivalent Power Supply 0 - 100 VDC (adj. current to 1 Amp) Immobilon-P transfer membrane 0.45 µm pore size; cut to same size as gel (Millip ...
Wash XCell box blotting module and trays with soap and water before proceeding. 0 128); font-weight: bold;"Reagents:Transfer buffer25 mM Tris HCl190 mM Glycine10% Methanol 0 0); text-decoration: unde ...
SDS电泳技术首先在1967年由Shapiro建立，1969年由Weber和Osborn进一步完善。当在样品介质和聚丙烯酰胺凝胶系统中加入SDS后，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小，其它因素可以忽略不计。 SDS是一种阴离子去污剂，它能破坏蛋白质分子之间以及其它物质分子之间的非共价键。在强还原剂如巯基乙醇或二硫苏糖醇的存在下，蛋白质分子内的二硫键被打开并解聚成多肽链。解聚后的蛋白质 ...
1. Load gel in apparatus as described by manufacturer. 2. Transfer proteins according to above ensuring that the NCM is toward the positive electrode. When using the Hoefer apparatus be sure to eit ...
This protocol was developed for the BIORAD protein gel and transfer apparatus. The buffers can be used with any electrophoresis/transfer system.
GeorgiaTimes"CARBONATE WESTERN TRANSFER SOLUTIONS Dunn Anal. Biochem. 1986: 157 GeorgiaTimes"1.5L GeorgiaTime ...
GeorgiaTimes"Blotting with BSA GeorgiaTimes"Blot in 5% mile/ 1X PBST (or 1X TBST) --60'/Rt GeorgiaTimes"Wash 2X for 5' in 1XPBST GeorgiaTimes"10Ab in 1% BSA/1X PBST --60'/Rt Geor ...
1. While your SDS-PAGE gel is running make your transfer buffer and chill to 4°C. Check that you have a frozen buffer dam is ready (stored in freezer next to Shikha top shelf to the right s ...
蛋白质序列分析和结构预测
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