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推荐书籍：《蛋白纯化与实验鉴定指南》、《生物工程下游技术》、《酶工程》、《酶制剂工业》 1）我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用GST做亲和层析，但效率只有50~60%左右。洗脱完融合蛋白不需要助溶剂，但 ...

一、超临界流体色谱的定义 使用超过临界温度和临界压力的流体（Supercritical Fluid）作流动相进行分析的色谱法称为超临界流体色谱法。即流动相不是气体、也不是液体，而是单一态的流体。 二、超临界流体色谱（SFC）的特点 SFC方法的产生及其发展，是由它本身的特点所决定的，具有与GC及LC方法显著不同之处而居独到。 1、本方法的流动相是超临界流体，具有与液体相近的密度，因此它有强的溶解性 ...

从重液滴通过另一液体滴落，溶质在两相中间实现分配的原理出发，进行设备与过程的研发转变，20 世纪 60 年代发明了连续液/液的高速逆流色谱(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)技术，目前已广泛应用于生物、医药、天然产物、环境分析、食品等领域的分离、分析和用于质控的指纹图谱的制定工作。高速逆流色谱主要利用有机/水两相系统分离和纯化天然药物制备 ...

高速逆流色谱属于逆流色谱的范畴，逆流色谱是新型的分离手段，它的主要分离原理是利用样品在固定相和流动相之间的差异也就是分配比不同而进行分离的，值得注意的是逆流色谱的固定相和流动相都是液体，其主要优点是没有传统色谱的死吸附，样品的回收率高等特点。 逆流色谱源于逆流分溶法，也就是用实验室经常使用的分液漏斗进行连续的液液萃取，根据样品在两种互不相溶的溶剂中分配比不同而进行分离。 逆流色谱早期发展的方法有液 ...

问：现在我用的南京建成的试剂盒来测脂肪酶，可是结果可以说是乱七八糟，一点也不稳定，这个问题也咨询过几位师兄，也有类似情况发生。不知道各位战友有没有碰到过这种情况？可有解决办法或者其他的测定方法？能否传授一下小弟？不胜感激！ 答：我也用过南京建成的试剂盒，结果和你一样，看来试剂盒测脂肪酶还很不成熟。你可用常规方法（聚乙烯醇橄榄油乳化法），方法简单可靠，到处都能查到此方法。 答：乙烯醇的办法我试过， ...

问：向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教！ 答：可以考虑采用 橄 榄 油乳化液法测定脂肪酶的活力，具体步骤如下：取100 ml三角瓶4个，每瓶加人5 mL磷酸缓冲液（pH= 7.5 0.02 5mol/1）和4m l，聚乙烯醇橄榄油乳化液，置于37 C水浴中保温5 min，然后在两个瓶中各加人1 MI.酶液，从加人酶液开始精确计算时间，继续保温10 min，取出后立即加入95% ...

纸色谱属于液一液分配色谱。 纸色谱使用的滤纸是载体，附着在纸上的水是固定相。样品溶液点在纸上，作为展开剂的有机溶剂自下而上移动，样品混合物中各组分在水-有机溶剂两相发生溶解分配，并随有机溶剂的移动而展开，达到分离的目的。 选择纸色谱条件主要是选择合适的展开剂。 合适的展开剂一般有一定的极性，但难溶于水。在有机溶剂和水两相间，不同的有机物会有不同的分配性质。水溶性大或能形成氢键的化合物，在水相中分配 ...

问：各位大侠能不能告诉我碱性磷酸酯酶标记的蛋白A和IgG二者在elisa中有何区别！它们的实验效果有什么不同？ 答；是有所不同的，前者是运用蛋白A与抗体（可以是各种可与抗原反应免疫球蛋白）的fc'片断进行非特异性的结合而起到代替二抗的效果。而IgG是针对一抗（主要是某一特定的与抗原反应的Ig，可能会因为轻链的相同的产生交叉反应）的抗抗体，其反应是特异性的。 因而在实验中要根据你的需要来做选择，前者 ...

问：我要做不同辣椒品种酯酶同工酶差异性分析，电泳实验的聚丙稀酰胺凝胶中到底需要加SDS吗？我只知道加了是按分子量大小分离的，不加的话电荷也能影响酯酶在胶板中的迁移速度，我查的酯酶同工酶资料中有些加了SDS，有些没有加，到底加不加呀？望高手指教！ 答：加与不加都有意义。加了SDS后蛋白就会变性，SDS能打断氢键和疏水键，上样Buffer中的还原剂巯基乙醇或DTT则能够破坏蛋白质二硫键，使蛋白的构象和 ...

问：我做的是细胞，单核细胞的，怎么自己去做呢？我想自己做，谢谢！很麻烦吗？ 答：目前用酶组织化学方法标记单核细胞做的人比较少，可考虑采用免疫细胞化学技术，如用CD68， alpha-AT， lysozyme等抗体。 答：我也在查这方面的，单核细胞的标记问题，现在查到的是可以用hoechst标记，Hoechst是能与DNA A—T碱基对特异性结合的双苯并咪唑荧光染料，细胞核着色，紫外光激 ...

激酶（kinase）：是能够在ATP和任何一种底物之间起催化作用，转移磷酸基团的一类酶。ATP有三个磷酸基团，其中两个是通过一个高能磷酸键结合，激酶的作用是催化这个高能磷酸键的水解，并利用释放出来的能量，将一个磷酸基团转移到底物分子上。值得一提的是，激酶的活性需要镁离子的存在，因为参与激酶反应需要镁离子和ATP形成Mg—ATP复合物。 ATP＋底物——&mdas ...

问：龙葵碱中毒可以抗胆碱酯酶抑制作用，是不是就是说对抗了胆碱酯酶分解胆碱的作用？从而是胆碱积蓄，造成中毒症状？那么有一种药物去代替胆碱酯酶去分解胆碱，就可以解毒了是不是？那么龙葵碱中毒的机理就和蛇毒中毒的机理是不是一样的？那么请问各位有没有这样的药物可以起到这样的作用呢？它的化学成分是什么呢？ 答：1、龙葵碱为生物碱，是从茄科植物龙葵的全草或未成熟的果实中提取分离出的一种生物碱．有阻止胆碱酯酶活性 ...

问：关于胆碱酯酶，我科用的是试纸条法，参考值20-80U，而今天一老大夫来提意见，说我们的报告不规范！应当报告胆碱酯酶活性百分数，还有什么轻度有机磷农药中毒为正常的50—7%，中度中毒为30—50%，重度中毒多在30%以下。慢性有机磷农药中毒全血胆碱酯酶活性在50%以下。等等。 这是怎样的一种报告方法呢，其中的百分数又是怎样得出的呢？ 我个人的意见是：这是一种较老的病情分类 ...

纸色谱法，系以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开的分配色谱。供试品经展开后，可用比移值(Rf)表示其各组成成分的位置（比移值＝原点中心至斑点中心的距离／原点中心至展开剂前沿的距离），但由于影响比移值的因素较多，因而一般采用在相同实验条件下与对照物质对比以确定其异同。作为药品的鉴别时，供试品在色谱中所显主斑点的颜色（或荧光）与位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。作为药 ...

问：本人想写一篇关于有机磷中毒的文章，可是胆碱酯酶的测定是用KU/ml来表达，而有机磷中毒的分级却用百分比来表示，其中有换算公式吗？求助哪位大师帮忙解释。谢谢！ 答：我认为楼主可以取你单位实验室胆碱酯酶正常值范围的平均值，用病人测定值与之比较得出百分比，这个问题好像从来没有书籍提到过，我看了一下第五版《诊断学》，其中讲到有机磷中毒分级时指的是正常平均值的百分比。 ...

我自己做的幻灯片，与大家分享。 ...

问：我想利用乙酰胆碱酯酶染色将小鼠结肠平滑肌中的胆碱能神经显示出来，并用软件作定量分析，但不知该染色方法所用试剂及具体方法，上海何处可做该染色？请各位大侠帮帮忙！ 另不知这种方法与将肠黏膜匀浆后测定乙酰胆碱酯酶，那一种更好？谢谢！ 答：乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase） 染色步骤 1、下述溶液内孵育15分钟37C 碘化乙酰硫胆碱 12.5 mg 蒸馏水 2.5 ml 0 ...

问：红细胞膜上的乙酰胆碱酯酶的检测，还有血液的保存。知道一点信息的请联系我哦。 答：红细胞乙酰胆碱酯酶的简写为AChE。 用AChE催化底物乙酰巯基胆碱（ACTI），生成巯基胆碱，蓝色的氧化型二氯酚吲哚酚（DPIP）被还原成无色化合物，在600nm处监测吸光度变化即可测定AChE活力单位。结果 在日立7060生分分析仪上测定85例健康人AChE，参考值为46.6-61.6U/gHb。批内CV2.2 ...

问：这可能是一个非常初级的问题，但查了几本书却无任何信息，文献上都是轻描淡写地一提，好像是太原始了似的。可是，我真的不知道该方法如何操作——酯酶浓度，配方以及染色时间等等，盼各位战友的回音。谢谢。 答：以前做过，是做淋巴细胞的。不过巨噬细胞方法一样的，更容易出结果。 非特异性酯酶一固定液 甲醛-丙酮缓冲液(PH=6.6)Na2HPO4 20mg，12 ， 50 ...

问：我想做肌肉组织的乙酰胆碱酯酶染色，没有详细的步骤及注意事项，请熟悉的前辈们给予指点，不胜感激！ 答：1、动物麻醉后4％多聚甲醛（0.1M PB配制）固定。 2、取肌肉组织，用灌注液后固定3h。 3、若做冰冻切片，10％，20％，30％蔗糖脱水，用0.1M PB配制蔗糖。若做石蜡切片，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。 4、冰冻切片或石蜡切片。 5、石蜡切片经脱水后入0.01M PBS，冰冻切 ...