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问：哪位大侠做过测定土壤脱氢酶活性的实验，请指点迷津啊，先谢谢了。我在做标准曲线时，加入萃取剂（甲醇或丙酮）后，各管的上部出现沉淀，红色溶液位于管的下部，上下颠倒摇匀后各管都变混浊。放置一段时间后各管都变澄清，但均为无色，如果不上下颠倒而只是振荡最终也会都变成为色的澄清溶液，这是为什么啊？ 1 标准曲线的制作 1.1配制不同浓度的TTC液：从1mg/mlTTC溶液分别吸取1，2，3，4，5，6，7 ...

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问：试验做5脂氧酶的体外酶活试验，用于对药物的筛选，但是测定方法如果采用试剂盒的话，价格很贵，请教各位有谁做过比较方便的测定方法，希望大家给予帮助，谢谢！ 答：酶活的测定：0.2ｍＬ酶液移入20℃，0.8ｍＬ底物（底物配制：0.25ｍＬ吐温20分散于10ｍＬｐＨ9.0的0.2Ｍ硼酸盐缓冲液中，摇动下逐滴加入0.27ｍＬ的亚油酸，充分混匀使亚油酸的微细状体分散于液体中，加入1Ｎ氢氧化钠1.0ｍＬ摇 ...

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问：有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问： 1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置？也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。 2、整个反映体系配置须注意哪些问题？最后加DL-甘油醛还是NADPH。 3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度？请各位指教，谢谢。 答：在测定酶的活性时，有时由于酶的纯化不足，导致影响结果，在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点： （一） ...

问：请教各位高手：晶状体醛糖还原酶测定方法的具体步骤！谢谢！ 答：不知你要用那种方法测定？一般常用以下两种你可以作参考：配反应体系时注意要临用前加DL－甘油醛和NADPH。作NADPH标准曲线时NADPH至少要梯度稀释5个浓度。 如果不够详细你可以问问作者，山东潍坊医院内分泌科刘长山教授。 荧光法：血样1mI，加肝素抗凝管，1500g离心10分钟，红细胞用10倍体积的等渗盐水冲洗三次，加4倍体积 ...

问：各位大哥大姐好！小弟想测定一下本人分离出的拮抗菌是否为分泌出的几丁质在起作用！想采用在含有胶体几丁质的平板产生透明圈初步测定方法，但在实验准备过程中，碰到了些困难！首先，几丁质不知道哪里有卖的，打了好多家试剂公司，都没有；其次，胶体几丁质配制的方法，国内参考文献描述的有好多，我不确定哪中方法适用，能有结果！恳请园子里做过这方面实验的大哥大姐能帮我解决上述两个问题！ 答：这里面有胶体几丁质的配置 ...

问：很多生物防治用的真菌可以产生几丁质酶和蛋白酶等代谢产物，现在实验想检测这两种酶的活性的大小，不知道用那种方法，请教各位！有没有简单的方法如平板法，测代谢产物法等，具体方法如何？ 答：可以用透明圈法，具体做法就是提出几丁质粗酶液后在几丁质—PDA培养基上打孔培养一定时间然后观察透明圈的大小，测代谢产物应该是不行，因为几丁质酶分内外切酶，产物不一，测不出来的，你也可以用聚丙烯酰胺电泳检 ...

新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死，取脑放入冷的D-Hanks平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min，用含10% FBS的DMEM培养基终止消化，离心1000rpm 10min，去上清，再用含10% FBS的DMEM培养基重悬沉淀，经75µm筛网过滤，收集滤液，离心1000rpm ...

问：如何检测几丁质酶的活性？在一篇文章里看到过，是利用这个酶来酶解底物来测量的。我的问题是： 1、在测量该酶活性时，要不要把这个酶提取出来？ 2、它的底物时chitin底物溶液怎么配制？ 答：1、对几丁质酶酶活的检测一般不需要把几丁质酶提取出来，但最好能适当的浓缩一下酶溶液，因为几丁质酶的活性不是很高。 2、几丁质酶活检测的底物一般用胶状几丁质，浓度为0.5-1.0%，一般用PH5.0左右的醋酸 ...

问：我做几丁质酶已经有一年多了，现在也积累了一些经验，希望和做相关课题的同仁们相互交流一下经验，有问题的也可以问，我会尽量给大家回答，也希望知道的朋友尽量给予帮助。谢谢！ 问：我真是太激动了，现在正准备做几丁质酶的分离、纯化；查了很多资料，但还是不太清楚其活性测定方法（一般都是用sigma公司的，有一种试剂500mg就30美金），肯请你为我介绍实用的方法，谢谢！ 答：测几丁质酶活一般都用DNS ...

问：各位大虾，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌能产生几丁质酶么？ 答：自从1905年Benecke首次报道了溶几丁质芽孢杆菌（Bacillus chitinovirous）能产生几丁质酶以来，已发现了许多产几丁质酶的微生物，包括细菌、放线菌、真菌等。在细菌中，已知的产几丁质酶的有气单胞菌属、交替单胞菌属、杆状菌属、肠球菌属、紫色杆菌属、假单胞菌属、交替假单胞菌属、沙雷氏菌属、弧菌属、黄单胞菌属、小球菌属、 ...

近期的NEJM发表了一篇哮喘方面的文章——探讨几丁质/壳多糖酶与哮喘严重度的关系。是一个横断面（cross-sectional）研究，设计简单但严谨。有兴趣的朋友可以看看。下面是园子里的该文摘要： ttp://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=116&id=10442258&sty=1&tpg=3&age=0 ...

The manipulation of embryonic stem (ES) cells to generate targeted mutations via homologous recombination has proved an invaluable resource for researchers from fields as diverse as embryology immunol ...

问：我想请教一下各位，18家族几丁质酶与19家族几丁质酶是怎样进行分类的。究竟怎样对几丁质酶进行分类的？谢谢！ 答：你好，根据几丁质酶催化区氨基酸序列的同源性，可以把几丁质酶分为18，19，20家族。18家族的几丁质酶来源于细菌，真菌，病毒及一些植物。19家族的几丁质酶主要包括植物几丁质酶和部分链霉菌属的几丁质酶。20家族包括链霉菌属和人类的几丁质酶。 ...

问：大家有测蔗糖转化酶，蔗糖合成酶，淀粉酶类的实验的吗？我的一个同学现在正测这三个酶，有谁知道怎麽测吗？先提前谢谢了！ 答：粉酶好测，它降解淀粉生成葡萄糖，可以使用DNS还原糖法测定。蔗糖转化酶应该是水解蔗糖生成葡萄糖和果糖，那么可以通过测定果糖含量来测定酶。果糖测定在有机化学书上有，很简单的。也可以通过测定还原糖的含量来测定，蔗糖合成酶那么可以使用测定低物量减少的方法测定，既测定作为低物的葡萄糖 ...

问：我记得半年前见习时用的是PNP-G7法测α－淀粉酶，现在又改进为EPS-G7法，二者有何区别？哪个方法更好？再有二者的英文全称及汉语全文又是怎样的？ 我想：EPS-G7应该是 46-ethylidene-(G7)-1，4-nitrophenyl-(G1)-α，D-maltoheptaoside46-亚乙基-α，D-麦芽7糖苷-对硝基酚。参考自：上海申能－德赛 ...

溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4、大瓶生理盐水 5、广口瓶（脐带数＋1） 6、止血钳（脐带数×2＋2） 7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶） 8、手术剪刀数把 使 ...

问：看到有文献将β-环糊精交联后作柱材料，用于从水溶液中吸附α-淀粉酶，吸附上去后再用溶剂把α-淀粉酶洗下来，也有人在α-淀粉酶的水溶液中加入β-环糊精或羟丙化β-环糊精来提高α-淀粉酶的稳定性。疑问： β-环糊精与淀粉都是多糖（β-环糊精是7个葡萄糖围成的筒状结构），用β-环糊精作柱材料， ...

软骨细胞的原代培养 龄新西兰乳兔(雌雄不限，共18只，分6次处理)溺死，置于75％酒精溶液中10分钟，拿入超净工作台，自眼外眦至耳屏前剪开皮肤暴露皮下组织，再次严格消毒，自外眦外将颧弓由根部剪断，暴露髁状突，去净髁状突表面软组织及软骨膜，以眼科剪剪取髁状突表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30- ...