土壤脱氢酶测定方法

问：哪位大侠做过测定土壤脱氢酶活性的实验，请指点迷津啊，先谢谢了。我在做标准曲线时，加入萃取剂（甲醇或丙酮）后，各管的上部出现沉淀，红色溶液位于管的下部，上下颠倒摇匀后各管都变混浊。放置一段时间后各管都变澄清，但均为无色，如果不上下颠倒而只是振荡最终也会都变成为色的澄清溶液，这是为什么啊？

1 标准曲线的制作

1.1配制不同浓度的TTC液：从1mg/mlTTC溶液分别吸取1，2，3，4，5，6，7ml, 分别放入50 ml的容瓶中，以蒸馏水定容至50 ml,各瓶中TTC浓度分别为20，40，60，80.，100，120，140ug/ml.

1.2每只带塞离心管内加入tris-盐酸缓冲液（pH=8.4)2 ml+2 ml 蒸馏水+1 ml TTC液（从低浓度到高浓度依次加入）,对照管加入2ml tris-盐酸缓冲液+3 ml 蒸馏水，不加TTC，所得每只离心管TTC含量分别为20，40，60，80.，100，120，140ug。

1.3 每管各加入连二亚硫酸钠1 g，振荡摇匀，使TTC还原，生成红色的TPF。

1.4在各管中加入5 ml 甲醇，振荡萃取3min，抽提TPF。

1.5取上清液于485 nm 波长下测吸光度值。

1.7绘制标准曲线。

答：我曾经做过脱氢酶活性的测定，基本步骤相同，不过最后使用甲苯提取的，做出来的标准曲线还不错，不过出现像上面的无色现象，出现无色会不会是由于萃取剂的问题呢。