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从HPLC色谱柱上去除样品残余物(图)

因为样品中经常会含有能够吸附在色谱柱固定相上的杂质化合物,所以应该经常对色谱柱进行清洗或冲洗。当色谱柱在多次进样后显示出柱效降低时,有必要采用适当的流动相对色谱柱进行处理,冲洗除去吸附在固定相上的污染物和样品残余物。 方法如下: ●将色谱柱从系统上取下,反向连接到输液泵上。色谱柱出口不要连接到检测器上,以免污染检测器流动池。 大多数的硅胶基质色谱柱反相冲洗没有问题,但是聚合物基质色谱柱并不能如此操 ...

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免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用

摘要:免疫胶体金技术是20世纪80年代发展起来的一种新型免疫标记技术,应用该技术制成的胶体金试纸条具有简便、快速、灵敏、特异性高等优点。文章介绍了胶体金技术的基本原理、制备方法、胶体金技术的特点以及利用该技术制成的胶体金试纸条在兽医临床上的应用。 关键词:胶体金;兽医临床;应用 免疫胶体金技术在人类医学上是一种常用的免疫标记技术,有其独特的优点。近几年来在生物医 ...

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质谱及质谱的目的

质谱,是一种分析方法,原理就是让带电原子、分子或分子碎片按质荷比的大小顺序排列,打出相应的谱线。待分析的样品分子在离子源中离化成具有不同质量的单电行分子离子和碎片离子,这些单电荷离子在加速电场中获得相同的动能并形成一束离子,进入由电场和磁场组成的分析器中;其中离子束中速度较慢的离子通过电场后编转大,速度快的偏转小;在磁场中离子发生角速度矢量相反的偏转,即速度慢的离子依然偏转大,速度快的偏转小;当两 ...

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应用包埋前免疫胶体金直接法研究细胞内病毒抗原超微定位

单位:湖北医科大学病毒所临床病毒室,武汉430071 关键词:包埋前免疫胶体金技术;免疫电镜;I型单纯疱疹病毒;病毒抗原 摘要目的:探讨细胞内病毒抗原的超微定位的方法。方法:采用包埋前免疫胶体金方法标记I型单纯疱疹病毒(HSV-1)抗原以研究该病毒在人胚肺细胞(HEL)内的超微定位。结果:发现金颗粒约为5nm,大小均一,在HSV-1囊膜、内质网膜表面 ...

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聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳

【实验目的】 1.掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理。 2.学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术,用于分离蛋白质。 【实验原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺作为支持物的一种电泳形式。单体-丙烯酰胺和交联剂-甲叉双丙烯酰胺相互作用可形成聚丙烯酰胺,该聚合反应以TEMED作为催化剂,以APS 作为引发剂。 丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的比例可决定凝胶网孔的大小,交联剂所占比重越大,凝胶的网孔 ...

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色谱柱再生——污染填料后对色谱柱的处理过程

1、故障现象 用户反映YWG C18 10μ(4.6mmX150mm)色谱柱使用20天左右后,柱压升高约1Mpa左右,分离效果变差,用蒸馏水清洗色谱柱没有明显改善。 色谱柱分离度不好,柱效不高,可能是用户分析发酵液,简单的过滤后进样分析,其中的蛋白质等可能没有去除完全,致使过多的蛋白质沉淀在色谱柱中,加之对沉淀的蛋白质没有及时冲洗,长时间后,破坏C18官能团,而且客户使用纯水长时间冲洗色谱柱 ...

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幽门螺杆菌IgG抗体胶体金免疫层析快速诊断试纸条的研制

一、方法 1、H.pylori配体固相硝酸纤维素膜的制备 H.pylor抗原室温融化后,12000r/min离心10min,取上清2mg/ml用0.01mol/L的PB缓冲液(pH7.2)以250μg/ml间隔,经BIO-DOT型XYZ3000点样仪dispenser线形包被于硝酸纤维素膜的观察结果的测试反应区,定义为检测带(T),距离检测带5mm远的质控带(C)用d ...

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购买实验动物时要注意什么

1、你需要的实验动物品种品系、年龄 2、是否有相应的实验动物动物质量合格许可证 3、发票 4、向对方了解实验动物运输方式(一般是空运)和到货时间5、提前了解到机场接货的程序和地点,做好接货准备(不提前准备的话,很可能因为繁琐的手续浪费大量的时间,导致实验动物滞留机场时间延长,气温、噪音等因素很可能导致实验动物因躁动斗殴、受惊吓等原因死亡) 6、最好有专车接送(理由同上) ...

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仔猪长途运输注意事项

我们一直用汽车调运大批15公斤左右的仔猪,虽然路途远,时间长,但运输相当成功,死亡率都控制在2%左右。现将具体运输注意事项介绍如下,供养殖户参考。 1、猪源的组织:一车仔猪可装300~500头,要使这些仔猪在最短的时间内同时装起,必须先派人到各养殖场(户)联系,通知他们何时将品种、重量合适,并进行免疫接种的健康无病的仔猪送到装车地点,然后过称上车。需要说明的是养殖场(户)送来的仔猪一般都喂得比较饱 ...

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为什么拿到手的动物体重和我当初订购的不一致?——运输过程中实验动物体重的消耗运输过程中实验动物体重的消耗

在实验动物的运输过程中,由于恐惧与疼痛、饥渴、疲劳、通风不良、过度拥挤、长时间的旅程而得不到“安宁”等因素会引发动物发生应激反应。发生轻度的应激反应,动物可表现为体重下降、脱水及对疾病的抵抗力降低,严重时可影响动物的质量,甚至导致动物在运输途中衰竭死亡。 在运输的不同阶段,动物表现出的症状也不相同。初期动物在恐惧、疼痛、关禁、拥挤等应激因子的刺激下,表现不安、狂躁和敏感性增 ...

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关于发布《关于善待实验动物的指导性意见》的通知

各有关单位: 为了适应科技发展的需要,贯彻落实《实验动物管理条例》(中华人民共和国国家科学技术委员会令第2号,1988),进一步加强实验动物管理工作,我们在深入研究和广泛征求意见的基础上,制定了《关于善待实验动物的指导性意见》,现予印发,请认真贯彻落实。 附件:关于善待实验动物的指导性意见 科学技术部 二OO六年九月三十日 ----------------------------------- ...

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胶体金免疫层析法检测抗幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体

作者:韩锋产阎小君侯瑜肖乐义郭晏海苏成芝 单位:中国人民解放军第四军医大学全军基因诊断技术研究所陕西省西安市710033 关键词:螺杆菌,幽门;细胞毒素相关蛋白A/分析;胶体金;免疫层析;抗体/分析 摘要目的建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)细胞毒素相 ...

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胚胎小鼠纹状体神经干细胞的分离培养及鉴定

材料 1、实验动物: 孕13d的昆明种二级小鼠。 2、主要试剂 主要试剂 来源 DMEM/F12 GIBCO rh-EGF peprotech rh-bFGF peprotech B-27 supplement GIBCO HEPES Sigma Trypsin Sigma Ploy-L-lysine ...

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乳鼠肝脏细胞原代培养

一周龄大鼠,断颈处死,活力碘消毒无菌取出肝脏,于无菌维持液中漂洗,用眼科剪仔细清除肝包膜韧带沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青霉素小瓶中,用眼科剪绞碎剪成0.1-1.0mm3大小的碎片,加入5倍体积无菌维持液用滴管轻轻吹打吸出上层血细胞再用无菌维持液反复清洗3~5次,加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液37℃消化,消化过程中不断震荡,至组织块边缘变薄(镜下观)离心(1000rpm10分钟)弃去上 ...

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人PBMC分离和培养

1、将静脉血20ml用ACD抗凝剂以容积比血:抗凝剂=9:1抗凝处理 2、按血:分离液=1:2注入国产淋巴细胞分离液上层,400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g,10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会: 1、实验中我用过肝素方法抗凝,但效果不好,因为肝素抗凝后交接层混浊,洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂,效果 ...

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人类滑膜原代细胞培养

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中(可不要动它),在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室; 2、在超净台中将标本放入培养皿中,加入α-MEM洗涤; 3、获得组织切开,仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织,附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织(可作另一管消化),仔细剔除脂肪组织,用α-MEM洗二次(以去除红细胞), ...

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色谱柱的清洗和再生方法

除非特殊说明,在所有情况下,所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40~60倍。 应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,比较色谱柱性能的改善,以确定清洗的效果。 确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。 应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。 ...

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脾脏单个核细胞悬液的制备

(1)大鼠断颈处死后,无菌取脾置于消毒平皿中称重; (2)超净工作台上置10cm直径无菌平皿,加入5~10ml D-hanks平衡液 ,置一80目的不锈钢筛于平皿中,脾脏置于筛网中,用剪刀剪碎脾,用5ml玻璃注射器针芯轻轻捻磨脾脏,使分散的细胞滤过金属网进入平皿的液体中, D-hanks冲洗一次; (3)用吸管吸取冲洗液,200目的钢筛过滤一次后收集至离心管中; (4)1000rpm,离心5~10 ...

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脐静脉内皮细胞培养

准备的药品:pbs199培养液,I型胶原酶(SIGMA)。 主要的器械:手术剪,镊子,止血钳,丝线,鞘管(PTCA用的动脉鞘的扩张管,6F或7F)。 首先,以PBS漂洗脐带1-2次,用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短(本人认为这个长度较为合适)。 之后,以止血钳提起一段脐带的一端,将鞘管插入脐静脉中,并经该鞘向静脉内注入PBS10-8ml左右(最后注入空气吹净残留液体),后以丝线将另一端结扎(一 ...

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人脐带平滑肌细胞培养

材料: 新鲜脐带 方法: 冰冷无菌D-Hanks液中漂洗,用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织,转入青霉素小瓶中,加入少量无菌D-Hanks液,用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片,用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴,再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次,加入10倍体积无菌胶原酶消化液(1mg/mL),室温消化30min,1000rpm离心5min,弃上清,加1mg/mL胰蛋白酶3 ...

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