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获得稳定的杂交瘤细胞系后，即可根据需要大量生产单抗，以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止，通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，鉴于绝大多数动物用杂交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤细胞与同品系的脾细胞融合而得，因此使用的动物当然首选BALB/c小鼠。本 ...

一、腹水型单抗的纯化 在单抗纯化之前，一般均需对腹水进行预处理，目的是为了进一步除去细胞及其残渣、小颗粒物质、以及脂肪滴等。常用的方法有二氧化硅吸附法和过滤离心法，以前者处理效果为佳，而且操作简便。 1、二氧化硅吸附法 新鲜采集的腹水（或冻存的腹水），2000r/min 15分钟，除去细胞成分（或冻存过程中形成的固体物质）等；取上层清亮的腹水，等量加入PH7.2巴比妥缓冲盐水（VBS；0.004m ...

目前动物用单抗，在动物疫病诊断和检疫、妊娠检测、性别鉴定等方面有广泛的应用，大多以诊断试剂（盒）的形式提供，其中核心试剂为标记的单抗。下面将介绍最常用的几种标记技术。 一、酶标记 1、辣根过氧化物酶（HRP）标记 辣根过氧化物酶（HRP）标记单抗和多克隆抗体的常用方法是过碘酸钠法。其原理是HRP的糖基用过碘酸钠氧化成醛基，加入抗体IgG后该醛基与IgG氨基结合，形成Schiff氏碱。为了防止HRP ...

问：看了园子里很多帖，有关氨基酸是否可以做成羧基上的酰氯，有人说fmoc保护的还可以，但是手头就只有boc保护的，于是想了下合成方案，望高手指点，就是在低温下（可能冰水中）boc-氨基酸：socl2=1：1（2：1）条件下，用甲苯作溶剂，三乙胺做傅酸剂缓慢滴加来促使boc-氨基酸做成酰氯，希望大家提提意见，是否可行？谢谢。 答：请注意，EDC/DCC等不是催化剂，要加化学计量的，不知道&ldquo ...

问：第一次做氨基酸的DNFB衍生，40ul的样品加入100 ul 0.5M pH9的Na2CO3，然后加入60ul的DNFB使终浓度为30％，但加入DNFB后出现了沉淀，请问怎么回事？是不是因为pH的原因？ 答：建议改NaHCO3DNFB该为10%。 答：国内都用的是NaHCO3，我参考的是外文文献，那几篇文章都出自同一个实验室，杂志的影响因子很高，他们使用的是Na2CO3，DNFB的用量也参考 ...

问：有个氨基酸品种很难冻干，请教一下有经验的战友，慢冻的话怎么冻法？ 答：如果你的处方溶点很低的话可以尝试预冻时间长一些，温度也尽量低一些。另外升华干燥温度升的慢一些也有利于冻干，这些我做的经验，另外楼上说的反复冻融也有帮助，你自己分析一下原因，相信会有好的结果。 答：设计好冻干曲线，采用梯度升温，反复预冻，反复升华干燥的办法设计冻干曲线。在这之前要测准最低共熔点！ ...

问：易溶于80醇，能溶于热水，但容易破坏，难溶于冷水。大孔树脂101不吸附，在油脂中该如何分离？ 答：可以参照青霉素的方法。首先看一下你的是什么性质的氨基酸如果是酸性的可以碱化，这样就很容易溶于冷水了，就可以先用醇萃取后碱化，溶于水，你说呢？ 答：是碱性氨基酸是否考虑将其转化为盐酸盐，静置分离后再用调pH的方法将其转化为中性，这时可以浓缩结晶。如果含盐太多着考虑用离子交换层析。不过一般浓缩结晶法 ...

问：氨基酸分D型和L型，请问一下，微生物中能够利用的氨基酸，有否分型的呢？是两种类型都能利用，还是只能利用其中一种型呢？是否不同的微生物利用的氨基酸类型又不一样呢？ 答：一般说来绝大多数都是利用L型的氨基酸，因为生物体中D型氨基酸很少，而且也只能被其相应的酶作用。但D型氨基酸的利用还是存在的。如参与细菌细胞壁的肽聚糖中发现D-谷氨酸和D-丙氨酸；在一种抗生素短杆菌肽中发现D-苯丙氨酸。D型氨基酸 ...

问：我的实验中需要使用HPLC做多种氨基酸溶液的定量分析，请问在使用氨基酸柱时，是不是只要直接进样就好了，不需要另外对氨基酸进行衍生化？ 再请教一个问题，在选择氨基酸柱时一般选用哪种型号较好，我主要测8种必需氨基酸，氨基酸柱和HPLC的型号要搭配吗？我是超级新手，请知道的朋友帮一下忙，万分感谢！ 答：分析氨基酸必须衍生化，因为绝大部分氨基酸无紫外吸收，只有少数几个含苯环的氨基酸才有明显的吸收，也 ...

问：最近做氨基酸含量得测定，我买的标准品是sigma得，是粉剂，怎么溶解，请大家帮帮忙啊？谢谢！ 答：日立氨基酸分析仪，标样本身是溶液，用0.02NHCL稀释即可。 答：溶解方法很多吧，用HPLC测，有用甲醇溶的，有用双蒸水溶的，有用流动相溶的，看自己怎么测吧。但是水溶会很慢。尤其是谷氨酸，谷氨酸盐就不是了。 ...

问：新购的非必需氨基酸sigma，瓶子上注明为100×，文献上说需要添加量为1%。这里的1%如果换算为原液的量是不是就变成万分之一。另外有些文献上说0.01mM/L又是多少呢，怎么换算？ 答：是应该就是这个意思（１００ml培养液添加１ml），刚才是我理解错了。至于0.01mM/L，这个数字出现在另外一个文献上。也许１００ml培养液添加１ml非必需氨基酸后，非必需氨基酸的浓度就刚好是0. ...

问：1. Name: Boc-Glu(OBzl)-OH 2 Name: Boc-Glu(OcHex)-OH 3 Name: Boc-Glu(Ofm)-OH 请问各位大侠：上述保护氨基酸脱去羧基保护基但又不影响氨基保护基的反应条件。详细结构请看附件，谢谢！ 答：都是很常规的脱保护反应Boc对大部分质子酸路易斯酸敏感，所以要选择非酸性条件： 1、Pd－C/H2rt. Ref:.Org. ...

问：我最近用红系裂解物翻译系统表达一种32个氨基酸的短肽，因为实验条件有限，不能用35S标记的蛋氨酸进行合成，所以不能用放射自显影进行检测，我想问问能否用蛋白电泳的方法检测，我查文献看到有一种tricine gradient gel，不知道可不可以检测这种短肽？有没有人知道这种胶的配方？参考这个文献吧。 答：我分析小于10kd 的肽，就是参考的这一个。效果吗，很好呀！ 答：体外翻译系 ...

问：在高等生物中，尤其是人体内，所含有的蛋白质均由L－型氨基酸构成，但是，据研究表明，随着人体的衰老，机体内一些氨基酸会自发转变为D－型。这种立体议购现象的出现是否是机体开始衰老的一个标志，能否通过降低异构化过程来推迟机体衰老？欢迎大家讨论。 答：有意思，很有可能构型的确蕴涵着丰富的生物学信息。但这个过程能用什么方法才能控制呢？很有意思的命题！ 问：怎样识别和分离体内旋光性不同的氨基酸呢？目前来看 ...

问：哪位做过不进行衍生化反应直接测定氨基酸的试验，最好是反相色谱测定非芳香族氨基酸？ 答：可以作到用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01mol/L磷酸水溶液（pH=2.5）为流动相B，采用梯度洗脱，在25分钟内流动相A由35%增加到70%，并在27分钟时降为35%的A，用35% A平衡6分钟，检测波长为210nm，你可以试一下！ ...

问：小弟最近用20%盐酸水解某酯类中间体得到如下氨基酸，反应完后用NaOH中和至等电点附近，看到有些灰白色沉淀析出，静置过滤后，滤纸上却只留下了深褐色泥状固体，特别像巧克力化了那种样子，滤液还是呈红棕色，而且这东西(滤饼)在有机溶剂中几乎都不溶，很难重结晶，又来了一次酸溶碱沉还是这样的东西，请问高人如何将这种氨基酸提取出来并纯化？（注：我用滤饼和滤液分别点板，滤饼有三个点，说明肯定有杂质，而滤液反 ...

问：我实验中需要确定多肽（8肽）中的某个氨基酸的作用，把该氨基酸用其它氨基酸置换。请教“进行氨基酸置换”时有什么要求？如何选择哪个氨基酸可用来做置换前者？选择时有什么原则或方法？ 答：1. 一般地，在蛋白中研究某部分（domain）氨基酸的重要性，通常采取Ala scanning的办法。因为Ala的侧链最简单，如果发生了什么效应可以减少一些其它因素的可能。 但这种情况，基 ...

问：最近在做酵母双杂交，有些营养缺陷培养基要单独加氨基酸，不知道这些氨基酸配成母液以后能不能高温高压灭菌啊？请各位高手指教，谢谢！ 答：一般来说，在配制培养基过程中，在高温高压过程中易配破坏的成分如葡萄糖，氨基酸，抗生素等，多采用0.22um的滤膜过滤除菌。所以，建议楼主最好，过滤除菌后单独加入。 问：基酸不能高压灭菌吗?？可是在测定蛋白质中氨基酸含量的时候，酸解的条件可是110℃浓盐酸的条件下 ...

问：小分子水溶性γ位的氨基酸酯如何水解？如何显色？如何析出固体？谢谢！ 答：是谷氨酸吗？1）甲醇/NaOH水溶液，或THF/NaOH水溶液皂化。2）水合茚三酮显色。3）等电点水/甲醇重结晶。 答：甲醇溶解，加入过量1N NaOH搅拌，监测原料是否消失。茚三酮显色。反应完后PH调至中性，浓缩至干，水|甲重结晶。 答：当然会啊，所以要注意PH值。一般顶多用1N的NaOH，而且还要保持在冰浴 ...

建议：开辟一系列植化讨论专题，欢迎大家踊跃发言。大家可以随意提出自己得看法和意见：大到植化的研究进展，小到实验研究技术。 Topic大致包括： 1、天然药用植物的提取和分离； 2、天然化合物的结构鉴定和解析； 3、天然化合物的结构修饰和衍生化处理； 4、天然化合物的药理活性； 5、天然药用植物的研究进展； 6、新方法新技术的研究及应用进展； 7、天然药用植物化学在中药现代化中的地位 ...