2-AAF/PH(2-乙酰氨基芴灌喂+2/3肝切除）模型制作标准操作规程(SOP)

名称：2-AAF/PH(2-乙酰氨基芴灌喂+2/3肝切除）模型制作

关键词：2-乙酰氨基芴，肝切除

目的：制作制作肝卵圆细胞（肝脏干细胞）增殖的模型

原理：肝脏是个再生能力非常强的器官，一般由肝细胞来完成肝再生，当肝损伤严重时，则启动为卵圆细胞增殖并分化为肝细胞和胆管细胞来完成肝脏再生。内源性肝脏干细胞是指存在于肝脏内具有增殖分化为肝细胞和胆管细胞的能力的一类细胞,一般认为卵圆细胞是内源性肝脏干细胞的主要成分。肝卵圆细胞增殖的动物模型有几种，主要是必须破坏肝细胞或抑制肝细胞再生，同时通过部分肝切除或化学药物来刺激肝脏再生，而启动卵圆细胞增殖。比较经典的就是2-AAF/PH模型

主体内容：

肝卵圆细胞增殖模型的制作参见Solt-Farber方法。每日按10mg/kg剂量灌喂2-乙酰氨基芴(2-acetyailamifluorene, 2-AAF),连续4天，第5日在乙醚麻醉下行2/3肝切除(下附肝切除方法)，手术当日不灌喂2-AAF，术后按10mg/kg剂量继续灌喂一周。2-AFF用分子量400的聚乙二醇溶解成浓度为2mg/ml的溶液。

附：肝切除方法

（1）麻醉 采用乙醚吸入全麻。

（2）使大鼠仰卧，四肢固定，皮肤消毒后，在剑突下取正中切口，切开皮肤，皮下组织，肌层到腹腔。切口长3厘米左右。

（3）在切口上方事先放一消毒后的结扎线，用双手轻轻挤压切口两侧使肝脏露出体外。将肝脏四叶（右侧叶、中叶、左叶和尾叶）中的左侧叶及中叶翻向上方结扎线处，切除量为全肝的70%，用结扎线将上述2叶的根部（血管束部）结扎。在结扎线上方将上述3叶切除和止血。

（4）将余肝返回腹腔，缝合肌层，皮下组织及皮肤。

主要参考文献：Petersen BE, Zajac VF, Michalopoulos GK. Hepatic oval cell activation in response to injury following chemically induced periportal or pericentral damage in rats. Hepatology. 1998 ,27(4):1030-8.