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        重症急性胰腺炎动物模型制备标准操作规程(SOP)

        互联网

        5213

        名称:重症急性胰腺炎动物模型制备

        关键词:重症急性胰腺炎

        目的:制作重症急性胰腺炎动物模型

        背景知识:这是我师兄的课题中的部分,技术很成熟

        原理:SAP的发病机理复杂,主要有胰酶异常激活、白细胞过度激活、胰腺微循环紊乱等学说,在造成胰腺损伤的同时。

        激活胰腺内的炎症细胞使其释放炎症介质,这些炎症介质逸入血液循环激活机体其他炎症细胞,释放大量的炎症介质,引起瀑布反应(cascade),促成全身炎症反应综合征状态(systemic inflammatory response syndrome, SIRS)和多器官功能衰竭。

        主体内容:

        1. 动物术前准备和麻醉

        所有大鼠在模型制备前均在实验室用普通鼠料饲养两周,以适应环境。术前均禁食12h,自由进水。各组大鼠均用戊巴比妥钠30mg/kg,腹腔内注射麻醉,成功后用一小塑料通气管放置口咽,以防气道窒息,腹部去毛,平卧固定,碘伏消毒颈部、腹部和腹股沟区。

        2.制作动物模型

        取上腹部正中切口1.5cm,进腹后,对照组:仅翻动十二指肠并触摸胰腺数次。

        SAP组和各药物治疗组:制作模型参照Aho等介绍的方法并加以改进,沿幽门寻找十二指肠,将其提至切口外,暴露胰胆管进入十二指肠处即十二指肠乳状,在肠壁对系膜缘,将针尖端磨钝的5号针穿刺入十二指肠肠腔内,经其乳状开口进入胰胆管约0.5cm。

        同时近肝门处用无损伤小动脉夹夹闭胰胆管,防止行胰管注射液体向肝脏反流,由微量泵控制,恒压恒速下,注入新鲜配制的5%牛磺胆酸钠1.5ml/kg,注射速度为12ml/h,完毕后,抽出针头。

        小动脉夹夹闭近乳状胰胆管5min,确定胰腺出现肉眼可见的水肿、出血变化后,去除动脉夹,用无损伤线修补十二指肠穿刺口的浆肌层。待确认腹腔动脉导管位置妥当后,缝合切口并包扎。

        3 .导管的放置

        静脉置管:在麻醉后制模前,经右侧颈内静脉切开插入一根PE50聚乙烯导管作为静脉输液。

        动脉置管:在制模后关腹前,经右侧股动脉将一根PE10聚乙烯导管逆行插入腹主动脉,使导管末端至腹腔干动脉开口处,用Evans 0.2ml注入导管内,立即观察胰腺血管是否染色,以确认导管位置深度,实验完毕行解剖再次证实导管位置。所有导管通过皮下从肩胛下穿出固定导管,并用一根约30cm长绳固定大鼠,允许其自由活动。

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