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我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

一、开机步骤： 1． 打开氮气总阀，将分压表调至0.2Mpa。再调节淋洗液瓶上分压表的分压至 5~6psi。 2． 接通 ICS－2000 主机电源，开启电脑，等待屏幕右下角出现图标后，启动桌面的图标，进入Broswer界面，找到“ICS－2000_Tradition_System_AS50.pan”文件并双击进入变色龙软件的仪器控制界面。 3． 排除泵内气泡： ...

一、开机前准备 1. 实验室温度应保持在10~30℃之间，湿度小于80%。 2. 根据实验要求，选择合适的柱子，按装柱子，准备相应的流动相并过滤脱气。 二、开机 1. 依次打开510泵、检测器和计算机电源开关，设定合适的波长和AUFS 值。 2. 双击桌面上的HS V4.0图标，进入工作站系统。 三、编辑LC分析方法 1. 双击“方案”图标，输入初始参数。 2. 双击HS ...

1、在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面。 2、记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(为了省钱)。 3、如 ...

【求助】请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21 ？ 参与者：liqunfeng 请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21？？谁帮帮我啊 参与者：xiaolx 你在网上搜搜别人的实验中怎么检测的，不就知道了。 p38，我师姐做过免疫组化。 参与者：zhangyuelin1999 检测信号通路现在用的比较多的方法应该是Western blot，它是测细胞中的蛋白含量（半定量）的最好方法了，免 ...

【求助】免疫组化 参与者：andywfa 我想请教一下，液氮冻存的组织，能否用来做免疫组化? 叩谢了！ 参与者：organer 当然可以，只要你冻存方法正确，冻存可以保护细胞，当然也可保护细胞表面抗原和组织抗原 参与者：zgxsea 液氮冻存组织一般用来提取蛋白、DNA或RNA，做相关指标的检测。如用其做免疫组化，存在一个技术性难题，即冻存的过程中，细胞内易形成冰晶，并破坏细胞结构，做了切片染色后 ...

【求助】哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 参与者：vensentgwx 哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 告诉我哪里有介绍也行，我自己在网上没找到。万分感谢！！！ 参与者：saurea 细胞膜是主要由脂质双分子层和膜蛋白构成，是一种选择透过性膜，在正常的生理机能状况下，能较好地阻碍外界离子和亲水分子的进入。但是当于其施加强度为KV/cm、持续时间为μs～ms级的电脉冲时，细胞 ...

【求助】测定NF－κB 活性 参与者：sandy99 实验中设计测定NF－κB 活性，我查的资料有以下几种选择： 1、EMSA。请教所设计的标记探针的序列？以及该实验的注意事项。（没做过） 2、抽提核蛋白，用P65抗体做Western Blot. 请问性价比较高的，好做的是哪个公司的抗体？还有啊，如果这个抗体用FITC标记过，是不是就可以用来做激光共聚焦实验？也可做WB？ ...

一．开机前准备 1．根据需要选择合适色谱柱。 2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。二．开机 1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。 2．等各仪器自检通过后，开微机进入Windows NT，双击millog.exe，进入millennium 32 工作站。 三．编辑仪器方法 1． 选择所需Project，run sample上击右键，选择所需仪器，联机。 2．点击 in ...

【求助】如何处理钙离子浓度变化数据 参与者：zufu 请教各位战友，我用荧光显微镜测血管平滑肌钙离子浓度变化，用药物刺激后可以得到钙离子时间浓度曲线，但各组之间差异较大。大家是如何处理这些数据的，因为要比较不同浓度药物刺激后钙离子的变化。 用药前钙离子稳定在一定水平，基本是一条直线，但用药后就是一个先升高后降低的曲线了，变化快，如何比较用药前后的变化，大家如何取数值并分析，是一段时间内的平均值还是 ...

【求助】fluo-3 的激发，发射波长疑问 参与者：wjg200022 最近我在测细胞内的钙浓度，用的是fluo-3 探针，但选多大的激发，发射波长很为难，有文献用的是488/515nm，有的用的506/526nm，我打算用流式细胞仪测，有做过这方面的给点指点，谢谢。 此外我找到一段原话：“Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙 ...

目的　利用时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）技术建立人血清促卵泡激素（hFSH）的检测试剂。方法　采用双抗体技术建立hFSH- TRFIA的检测试剂，对试剂的各项指标进行评价。结果 hFSH- TRFIA检测试剂的测量范围为1～256U/L，灵敏度为0.08U/L，分析内和分析间的精密度分别为26%～42%，6.1%～8.6%，与人黄体生成素（hLH）、人促甲状腺素（hTSH） 和人绒毛膜促性腺激素（hCG）的交叉率分别为0.14%，0.08%和0.01%。30份异常血样用该试剂同类试剂同时检测，其相关系数为0.993。结论　试剂各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品。

DGGE，CGGE及TGGE三种方法是基于相同的原理而设计的突变检测方法，它仍均是根据DNA的解链特性而设计.对于同一定序列组成或的DNA片段来说，它具有恒定的解链温度(Tm)，但若其序列发生改变时，Tm值亦发生改变，在含有变性因素(变性剂， 高温)的凝胶半进行电泳，当其比链解开形成分叉时，电泳迁移的速度就会改变.Tm值 全要取决于DNA的碱基组成，序列中出现单碱基替换时，Tm亦发生改变，电泳迁移 ...

1.目的 建立一个大连依利特P230高效液相色谱仪的使用、维护保养标准操作程序，使操作过程标准化。 2.职责 质量部QC负责本文件的起草，质量部及QC检验人员负责本标准的实施。 3.范围 本标准适用于大连依利特P230高效液相色谱仪的使用、维护和保养。 4.内容 4.1 仪器组件、型号 4.1.1 仪器组成：P230高压输液泵、UV230紫外-可见检测器、EC2000色谱工作站。 4.1.2 电源 ...