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【求助】测细胞上清液胰岛素 参与者：hanfeng8225 各位师兄.师姐： 我养的INS－1细胞，想测细胞上清液胰岛素，请问用什么方法啊，谢谢指教！ 新手请多帮助！谢谢！ 参与者：yuqi881 检测液体中胰岛素含量可用的方法： 1、ELISA方法：需要ELISA方法检测胰岛素的试剂盒和酶标仪。 2、放射免疫方法：需要放射免疫法检测胰岛素的试剂盒和放射免疫分析仪 3、化学发光方法：需化学发光法检 ...

SP 2/0是小鼠骨髓瘤细胞株，贴壁生长，科室给学生开实验就用此细胞，所用培养基为1640，用小牛血清，浓度15%生长较好。培养孵箱为37度，5%的CO2。 开始将复苏的细胞传到小培养瓶（如25ml)，由于细胞分泌各种因子及细胞间的相互作用，因此生长较快，1-2天就可进行传代（当然要达到80-90%的融合）。 消化采用0.25%的胰酶，在显微镜下观察，看细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少 ...

【求助】免疫细胞化学固定液的选择 参与者：swift11 求助各位大虾： 我是新手上路，准备做免疫细胞化学。我要检测细胞内的一种蛋白质，用什么固定也比较好？ 参与者：琴心剑胆 4%多聚甲醛 参与者：docqian 用4% PFA固定一般比较好。 此外也可以用丙酮，或者甲醇固定。 需要说明的是，固定对有些抗体很重要，需要选择特定的固定，一般时候，抗体的说明会说明。例如，我染色细胞线粒体的时候（oxp ...

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

1 按下稳压电源工作电源开关键至“ON”状态。依次接通P680型输液泵、ASI-100自动进样器、柱温箱、检测器、电脑。 2 更换蠕动泵清洗瓶中5%的甲醇(如果仪器经常使用则建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。) 3 确认洗针瓶中的洗液是否太少，若太少，则需补充或更换。洗液一般为：50%的甲醇。 4 排泵内气泡 4.1 拧松泵右侧的快速清洗阀（反时针两圈 ...

我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

一、开机步骤： 1． 打开氮气总阀，将分压表调至0.2Mpa。再调节淋洗液瓶上分压表的分压至 5~6psi。 2． 接通 ICS－2000 主机电源，开启电脑，等待屏幕右下角出现图标后，启动桌面的图标，进入Broswer界面，找到“ICS－2000_Tradition_System_AS50.pan”文件并双击进入变色龙软件的仪器控制界面。 3． 排除泵内气泡： ...

一、开机前准备 1. 实验室温度应保持在10~30℃之间，湿度小于80%。 2. 根据实验要求，选择合适的柱子，按装柱子，准备相应的流动相并过滤脱气。 二、开机 1. 依次打开510泵、检测器和计算机电源开关，设定合适的波长和AUFS 值。 2. 双击桌面上的HS V4.0图标，进入工作站系统。 三、编辑LC分析方法 1. 双击“方案”图标，输入初始参数。 2. 双击HS ...

1、在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面。 2、记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(为了省钱)。 3、如 ...

【求助】请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21 ？ 参与者：liqunfeng 请问如何检测RAS、MAPK、p38、p21？？谁帮帮我啊 参与者：xiaolx 你在网上搜搜别人的实验中怎么检测的，不就知道了。 p38，我师姐做过免疫组化。 参与者：zhangyuelin1999 检测信号通路现在用的比较多的方法应该是Western blot，它是测细胞中的蛋白含量（半定量）的最好方法了，免 ...

【求助】免疫组化 参与者：andywfa 我想请教一下，液氮冻存的组织，能否用来做免疫组化? 叩谢了！ 参与者：organer 当然可以，只要你冻存方法正确，冻存可以保护细胞，当然也可保护细胞表面抗原和组织抗原 参与者：zgxsea 液氮冻存组织一般用来提取蛋白、DNA或RNA，做相关指标的检测。如用其做免疫组化，存在一个技术性难题，即冻存的过程中，细胞内易形成冰晶，并破坏细胞结构，做了切片染色后 ...

【求助】哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 参与者：vensentgwx 哪位大哥给指点一下电穿孔阿，xiexie 告诉我哪里有介绍也行，我自己在网上没找到。万分感谢！！！ 参与者：saurea 细胞膜是主要由脂质双分子层和膜蛋白构成，是一种选择透过性膜，在正常的生理机能状况下，能较好地阻碍外界离子和亲水分子的进入。但是当于其施加强度为KV/cm、持续时间为μs～ms级的电脉冲时，细胞 ...

【求助】测定NF－κB 活性 参与者：sandy99 实验中设计测定NF－κB 活性，我查的资料有以下几种选择： 1、EMSA。请教所设计的标记探针的序列？以及该实验的注意事项。（没做过） 2、抽提核蛋白，用P65抗体做Western Blot. 请问性价比较高的，好做的是哪个公司的抗体？还有啊，如果这个抗体用FITC标记过，是不是就可以用来做激光共聚焦实验？也可做WB？ ...

一．开机前准备 1．根据需要选择合适色谱柱。 2．在容器中放入已过滤脱气好的流动相，把吸滤过滤头放入容器中。二．开机 1．打开所需仪器的电源开关，打开氦气阀门。 2．等各仪器自检通过后，开微机进入Windows NT，双击millog.exe，进入millennium 32 工作站。 三．编辑仪器方法 1． 选择所需Project，run sample上击右键，选择所需仪器，联机。 2．点击 in ...