全部

1、吸尽旧的培养液（因为我是养在培养皿) 2、用D-HANKs清洗一次 3、加入0.125%/0.02%EDTA的胰酶(盖满皿底即可)。肉眼观察即可，看见皿底有一层薄雾。 4、加入完全培养基，以终止胰酶作用。 5、轻轻反复吹打细胞。 6、吸出一部分加入新的培养皿中。 注意： 1、可以用MEM或DMEM 2、EDTA可使细胞分散 3、BHK-21生长迅速 ...

都是贴壁细胞，在消化传代过程中，步骤如下： 倒尽旧的培养液－＞用无血清的培养基清洗一两次－＞加入一定量的胰酶，置于37度培养箱中5--10分钟，使细胞悬浮－＞显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞加入一定量的含血清的新培养液，以终止胰酶作用－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液。 注意：　 1、吹细胞时尽 ...

大多数朋友说推荐培养液为DMEM加10%胎牛血清，1%谷氨酰胺，我们这里用1640加10%新生牛血清，效果也不错。DMEM不容易观察，有时候等DMEM黄了的时候，细胞已经严重缺乏养料，1640颜色变化比较明显，也比较符合细胞当时的情况。 细胞置于5%CO2、37度培养细胞生长较快，根据你留在瓶里细胞的数量，50％两天后传代一次。0.25%胰酶＋0.01％EDTA消化，该细胞容易抱团，我是一般先用胰 ...

传代步骤比较传统： 倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。 我的体会是： 1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。 2、消化到 ...

我养过人类原代滑膜细胞，探讨传代经验：其实最好还是在细胞长满时、还没有接触性抑制之前传代为好。

将小鼠颅段神经管组织块（第6体节前）经0.75mg/ml胶原酶（152U/mg）换液消化3次，37℃20分钟孵育后，轻吹打获神经管，胶原酶通过冷培养基反复置换。 将神经管组织块置于经Fn预孵的75MM培养瓶中（0.25mg/ml纤粘连蛋白抽干后，以条件培养基洗涤备用），37℃培养30分钟后组织块贴壁，加DMEM/F12无血清条件培养基。48小时后去除组织块。2.5g／L胰蛋白酶常规消化传代。 无血 ...

SACC比较难消化，使用37度预热过的0.25%的胰酶一般消化5－8分钟即可，在看到细胞成片脱落后加入10％胎牛血清的培养液终止。 巴氏吸管吹打均匀，计数后传代。消化时一般不用EDTA，老板说对细胞损伤大，而且还要清洗几次，麻烦。只要消化下来，SACC很容易形成单细胞悬液。 ...

wish细胞是上皮细胞， 人羊膜细胞 ，培养基我用的是最常见的1640（10％小牛血清，加双抗）。 1、细胞长满培养瓶时既要传代。我用胰酶和edta的混合液消化。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。edta的终浓度是0.02%。 2、使用前37度预热，每个25ml培养瓶加9滴的胰酶和edta混合液，消化液的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶和edta混合液以后，为 ...

刚开始养SK-BR-3时，细胞状态不是很好，贴壁也不均匀，于是开始想办法，考虑是不是吹打的不够，或是传得过多，或是其它的什么，后来发现的确如此，细胞的生长状态与传代的方法有很密切的联系。 我的传代方法是： 以50平方厘米培养瓶为例，待细胞长满瓶底70％－80％ 1 、吸除或倒掉瓶内旧培养基。 2 、PBS 5ml加入培养瓶，轻轻晃动培养瓶，让PBS流遍细胞表面，倒掉。 3 、PBS 5ml加入培养 ...

RAW264.7因是单核巨噬细胞其生物学特性就是贴壁特别牢，普通的方法根本就不可能将它消化下来，这也是养这种细胞最头痛的问题。现将我的一点心得，简介如下： 消化液：0.5％胰酶、0.2％EDTA，实验前加温到37度 以50ml培养瓶为例： 1、细胞贴壁生长，长满瓶底80％时，弃去培养液，加D-HANKS 漂洗 两次； 2、 加入含胰酶和EDTA的消化液1－2ml消化37℃约2-5min，镜下可见细 ...

最初，用0.25%胰酶消化液传代，细胞脱壁容易，但是，吹打细胞180次左右，也只有80％细胞是单个细胞，而且，易引起细胞机械性损伤。于是，我改进方法。 现在，我的处理如下： 弃旧培养液 0.02％EDTA作用2分钟 弃EDTA 0.1％胰酶作用30秒 弃胰酶，继续消化2分钟 加培养液终止消化。一般吹打细胞30－40次，细胞基本为单个。 EDTA是一种化学螯合剂，主要作用主任已说。我要提醒一下：ED ...

培养液：MEM(GIBCO)，20％FBS，双抗100IU／ml； 原代细胞培养：取5kg左右兔空气栓塞法处死后断头，于无菌条件下从枕大孔处用大止血箝扳开颅骨暴露并小心取出脑组织放入装有DMEM的培养皿中，用眼科镊分离基底动脉后按常规平滑肌方法贴块培养。 传代： （1）吸除培养瓶内旧培养液。 （2）D-Hanks液冲洗2遍。 （3）加入消化液少许，以能覆盖瓶底为限。 （4）倒置显微镜观察发现细胞胞 ...

在F-12培养基中加入5％小牛血清、10mU/ml TSH、10µg/ml胰岛素、5µg/ml转铁蛋白、10ng/ml生长抑素、0.4ng/ml氢化可的松、10ng/ml甘氨酰－组胺酰－赖氨酸醋酸盐，每100ml培养液加入1ml双抗，用200ml培养瓶置CO2孵箱35℃培养。 每4天换液一次。待细胞有80％融合时进行传代。大约7－10天传一代。 将生长状态良好、有80％融 ...

1、培养液用的GIBCO的RPMI-1640。里面加10%小牛血清，青霉素+链霉素。消化时用0.25%胰酶。 2、我都是1640配营养液时现加血清和双抗，血清分装后直接由-20度到37度水浴箱中溶掉，没发现血清有沉淀现象。总体积100ml的培养液：90ml1640+10ml牛血清+1ml双抗，无其他物质了。培养过程中没发现有什么问题。 3、传代时，先吸掉培养液，我都不用倒掉的方法，怕由于瓶口而污染 ...

细胞增殖快非常好养，但是要及时换液，否则也很容易死亡、或变形。我养的最好的时候，天天都在换液，两三天就要消化传代。我用的消化液一般是 消化用含EDTA的胰酶0.25%，个人感觉效果比较好一点。 消化步骤：吸出培养液，加入PBS洗涤（视培养瓶大小加入相应的量，25CM加入1-2ML）而后加一次胰酶（25CM培养瓶加0.6ML）作用2-3分钟，轻轻摇晃使均匀作用在细胞层面上。要一直在显微镜下观察，以防 ...

我所用的卵巢癌的细胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA，几种细胞的特性不完全一样，但是我的传代的步骤是基本一致的： 细胞生长至80%汇合时传代，先倒掉培养液，加预先加好双抗的生理盐水或PBS 5-10ml（100ml培养瓶）后轻轻摇晃数次后倒掉，加0.25-0.35%的胰酶2ml，并使其分布均匀（这一点很重要，一定要注意工作台是否平整，否则容易造成胰酶分布不均匀而细胞消化不同 ...

(一)实验目的 了解细菌生长曲线的持点及测定原理，学会用比浊法测定细菌的生长曲线。 (二)实验原理 将一定数量的细菌，接种于适宜的液体培养基中，在适温下培养，定时取样测数，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，作出的曲线称为生长曲线。该曲线表明细菌在一定的环境条件下群体生长与繁殖的规律。一般分为延缓期、对数期、稳定期及衰亡期四个时期，各时期的长短同菌种本身特征、培养基成分和培养条件不同而异。 比 ...

【求助】ELISA检测中的问题 参与者：zhou3303 请教各位大虾，小弟用LPS刺激中性粒细胞（2.5×106/ml）表达细胞因子IL-1，TNF-a，IL-6的实验中，ELISA检测上清后，空白孔（只有培养液和细胞）的值也较高，有50pg/ml，甚至有的有300pg/ml，而LPS刺激组的值也只有空白组的2倍多，不知是什么原因，望不佞赐教。 参与者：用心聆听 我在做跟你类似的实验 ...

293T细胞差点被我养死，幸好我又将它起死回生，一点心得。 细胞传代：当细胞在细胞培养瓶内长满达到80％时就要传代，一传二，24小时后再传代。48小时传就不好了，如果在24小时后细胞没有长到80％，应该换新的培养基，不然，培养基变黄，细胞脱落。 细胞消化：将细胞培养瓶竖立放置，吸走培养基，如果培养基中的脱落细胞较多，说明细胞现在很容易脱落，只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%)，来回轻微晃 ...

【求助】MALDI-MS分析 参与者：wuwanjun MALDI-MS分析是什么分析，谢谢 参与者：wuwanjun 是不是-基质辅助激光解析电离质谱分析？ 参与者：jfeiharry MatriX AssistedLaser Desorption Ionization （MALDI），中文一般译为基质辅助激光解吸附质谱技术，其基本原理是将分析物分散在基质分子中并形成晶体，当用激光照射晶体时，由 ...