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        卵巢癌细胞的传代

        互联网

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        我所用的卵巢癌的细胞包括SKOV3、A2780、3AO、OVCAR3、HRA,几种细胞的特性不完全一样,但是我的传代的步骤是基本一致的:

        细胞生长至80%汇合时传代,先倒掉培养液,加预先加好双抗的生理盐水或PBS 5-10ml(100ml培养瓶)后轻轻摇晃数次后倒掉,加0.25-0.35%的胰酶2ml,并使其分布均匀(这一点很重要,一定要注意工作台是否平整,否则容易造成胰酶分布不均匀而细胞消化不同步),待细胞间隙变大时终止消化,加含10%血清的培养液(我用的是1640)4ml轻柔吹打,再按照需传代的比例(1:2或1:3)补足培养液后分装至2-3个培养瓶中。

        若细胞碎片较多,可在消化后不倒掉胰酶直接加含血清的培养液吹打后500rpm离心5min,再用培养液重悬分瓶。消化所需的具体时间依细胞的种类和状态而定,也和细胞的汇合程度有关,一般是80%汇合时最容易消化,若细胞长得太满,消化时间要适当延长,必要时可以将培养瓶移至培养箱内消化。另外,一次性培养瓶要比玻璃培养瓶所需的消化时间稍长。

        胰腺癌细胞我所养的是CAP,感觉不太好伺候,尤其是传代时很困难。我一般是在倒掉培养液后,加生理盐水或PBS冲洗,而后加一次胰酶作用3-5分钟,倒掉胰酶,再加2-3ml新的胰酶继续消化,这样加两次的效果好一些,但是吹打的时候还是很困难,总感觉细胞的贴壁能力太强了,明明看见细胞已经变圆了,可就是吹不下来。现在想想可能在胰酶中加EDTA会好一些。

        相比而言,还是HELA好养,细胞的状态一直不错,而且消化时也很容易。

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