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我正在培养MCF-7细胞，在此介绍一下我给细胞传代的经验： 细胞放在显微镜下观察，细胞无污染、退缩，等其长满培养瓶约70%-80%时即可进行传代操作，具体步骤如下： 1、 打开瓶盖，弃上清2.D-HANK‘S夜（以50ml培养瓶为例，下同） 2、吸管清洗后弃之； 3、加0.25%胰酶2吸管； 4、轻摇晃后置入37度温箱； 5、3-5分钟后置显微镜下观察，见细胞胞质退缩，变圆； 6、吸去 ...

Jurkat细胞（人外周血白血病T细胞），是一种悬浮细胞。我的经验如下： 1、培养液：RPMI1640，15％小牛血清，2％Na2CO3，1％HEPES，青霉素100IU／1ml，庆大霉素100IU／ml； 2、培养条件：5％CO2，37度，30％湿度； 3、细胞复苏：要快速将冻存管放入37度水中，不断轻轻摇晃，直到细胞完全溶解，加入10ml左右的培养液，800～1000rpm，10分钟离心，之后 ...

vero（非洲绿猴肾cell):贴壁细胞，以25ml小方瓶为例，培养液用的是MEM。 MEM的配制：10%小牛血清，1%双抗，3%谷氨酰胺，1~1.5%NaHCO3. 传代方法： 1、倒掉培养液，如果细胞脏的话可用PBS洗两次，否则不用。 2.、胰酶0.25%2ml消化1~3分钟，容易消化. 3、倒掉胰酶，加MEM9~12ml将贴壁细胞摇至悬浮，并用吸管吹匀，一传三或一传四。 4、置37度，5%C ...

【求助】测定细胞内钙离子浓度都有哪些方法？ 参与者：junxia 想测定某一蛋白对细胞内钙离子浓度的影响。请教各位大虾都有哪些测定方法？好像常用的是共聚焦？除此之外呢？ 参与者：gzgygy 单个观察用confocal。 群体准确性最高的不是confocal而是流式。 参与者：jc_484190 对，流式是不错的，建议你可以试试， 参与者：junxia 楼上两位能提供流氏的参考文献或资料么？ 参与 ...

【求助】关于测定细胞MDA的方法 参与者：m05yuwei 各位战友： 大家好！我想做细胞的MDA，不知用什么方法好。用比色方法一个样本需要多少细胞？细胞太少是不是测不出？有人说要达到一定数量才行。具体步骤可否详告？ 参与者：m05yuwei 没人帮个忙吗？ 参与者：无影无踪 MDA是丙二醛吗？如果是的就比较容易了 参与者：无影无踪 细胞内的检测需要经过适当的处理，即制成约10%的匀浆液，放置-2 ...

【求助】测细胞上清液胰岛素 参与者：hanfeng8225 各位师兄.师姐： 我养的INS－1细胞，想测细胞上清液胰岛素，请问用什么方法啊，谢谢指教！ 新手请多帮助！谢谢！ 参与者：yuqi881 检测液体中胰岛素含量可用的方法： 1、ELISA方法：需要ELISA方法检测胰岛素的试剂盒和酶标仪。 2、放射免疫方法：需要放射免疫法检测胰岛素的试剂盒和放射免疫分析仪 3、化学发光方法：需化学发光法检 ...

SP 2/0是小鼠骨髓瘤细胞株，贴壁生长，科室给学生开实验就用此细胞，所用培养基为1640，用小牛血清，浓度15%生长较好。培养孵箱为37度，5%的CO2。 开始将复苏的细胞传到小培养瓶（如25ml)，由于细胞分泌各种因子及细胞间的相互作用，因此生长较快，1-2天就可进行传代（当然要达到80-90%的融合）。 消化采用0.25%的胰酶，在显微镜下观察，看细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少 ...

【求助】免疫细胞化学固定液的选择 参与者：swift11 求助各位大虾： 我是新手上路，准备做免疫细胞化学。我要检测细胞内的一种蛋白质，用什么固定也比较好？ 参与者：琴心剑胆 4%多聚甲醛 参与者：docqian 用4% PFA固定一般比较好。 此外也可以用丙酮，或者甲醇固定。 需要说明的是，固定对有些抗体很重要，需要选择特定的固定，一般时候，抗体的说明会说明。例如，我染色细胞线粒体的时候（oxp ...

首先要把0.25%的胰酶和培养液在37度水浴20~30分钟(预热)。从培养箱中拿出培养的细胞瓶(一般我是让它长到90%几再传代的)，吸去培养液，可用PBS洗两遍。也可不洗。加入适量0.25%胰酶消化(试瓶子的大小而定，如250毫升的瓶子加1毫升就行了)，让它都浸湿细胞就可以吸去了。等个三十秒就在手上拍打，不要太用劲。就可以看到细胞脱落了，再加入3毫升左右的培养液吹打(这时加的培养液不要太多，否则难 ...

1 按下稳压电源工作电源开关键至“ON”状态。依次接通P680型输液泵、ASI-100自动进样器、柱温箱、检测器、电脑。 2 更换蠕动泵清洗瓶中5%的甲醇(如果仪器经常使用则建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。) 3 确认洗针瓶中的洗液是否太少，若太少，则需补充或更换。洗液一般为：50%的甲醇。 4 排泵内气泡 4.1 拧松泵右侧的快速清洗阀（反时针两圈 ...

我养的细胞都是乳腺癌细胞，以下几种： 1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可， 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液 ...

吸出培养基，吸得越干净越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培养箱消化。 是否需要用hanks 或 pbs之类得缓冲洗细胞并不绝对必要，我都没有洗，感觉应该洗一下更好，但也更麻烦并增加了污染得可能性。如果细胞长得太老，可以先加入1ml胰酶在细胞表面浸润一下就吸出来，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前最好预热到37度。由于胰酶平时保存在4度，反复预热对胰酶的活性不好，我的经验是将胰酶 ...

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。 由于我们实验室养细胞的时间也不是很长，所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底，也就是细胞与细胞之间没有间隙时，就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液，用D-Hanks液洗两遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底，然后静 ...

我培养过不少肺癌细胞（人类），其中绝大部分都是贴壁细胞，具体如： （１）　Ａ５４９（肺腺癌） （２）　ＮＣＩＨ４４６（小肺细胞癌） （３）　８０１（非小肺细胞癌） （４）　ＮＣＩＨ４６０　（大细胞肺癌） 在消化传代过程中，步骤基本一致： 吸去旧的培养液－＞用Ｈａｎｋｓ＇（１Ｘ）清洗一两次－＞加入一定量的消化液（Ｔｒｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ）－＞置显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞吸去消化液 ...

HePG2细胞属人肝肿瘤的恒生细胞株，L-02细胞则是人胎肝细胞株，二者所使用的培养基可以是一样的，即最常见的DMEM。一干使用低糖的。 细胞长满培养瓶时既要传代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度预热，细胞经PBS清洗两遍后，每个中号培养瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根据自己培养瓶的大小而定，原则就是能够盖满瓶底。加入胰酶以后，为使酶的活性最大，将培养瓶 ...

B16鼠黑色素瘤细胞。好像这株细胞还有亚型的，不过中科院说不清，我也就说不清了。总之是B16。 细胞总的来说比较好养，操作基本都是常规的。要求用胎牛10%1640、5%CO2、37度培养，一段时间为了省钱用过新生牛也不错。但是传代多了，细胞有形态改变。可以弃掉重新复苏。血清国产的杭州四季青，感觉不灭活比灭活要好养一些。 传代操作，主要是无菌操作。细胞增殖快非常好养，但是及时换液，否则也很容易死亡、 ...

材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D-Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g/L，NaCl 8.0 g/L，NaHCO3 0.35 g/L，Na2HPO4.7H2O 0.06 g/L或Na2HPO4 ...

一、开机步骤： 1． 打开氮气总阀，将分压表调至0.2Mpa。再调节淋洗液瓶上分压表的分压至 5~6psi。 2． 接通 ICS－2000 主机电源，开启电脑，等待屏幕右下角出现图标后，启动桌面的图标，进入Broswer界面，找到“ICS－2000_Tradition_System_AS50.pan”文件并双击进入变色龙软件的仪器控制界面。 3． 排除泵内气泡： ...

一、开机前准备 1. 实验室温度应保持在10~30℃之间，湿度小于80%。 2. 根据实验要求，选择合适的柱子，按装柱子，准备相应的流动相并过滤脱气。 二、开机 1. 依次打开510泵、检测器和计算机电源开关，设定合适的波长和AUFS 值。 2. 双击桌面上的HS V4.0图标，进入工作站系统。 三、编辑LC分析方法 1. 双击“方案”图标，输入初始参数。 2. 双击HS ...

1、在做多个同类酶切反应预混液时，水要多加1-5微升(当然不能超过预混液总体积的5%)，以防止最后一管酶液不够的尴尬局面。 2、记住所用酶的特性，不光体现BUFFER的选择上。也体现记住不同限制酶稳定性上。比如BamHI5小时内稳定（37度），而BglII16小时内都保留100%的活性；那么在用酶时，如果能反应16小时，就可以采用BamHI : BglII = 2:1的用量了(为了省钱)。 3、如 ...