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【实验目的】 1．掌握DNA重组技术的基本原理和基本方法 2．熟悉质粒DNA的小量制备及酶切鉴定方法 【实验原理】 1．DNA重组技术 重组DNA(RecombinantDNA)技术是遗传工程的核心技术，也是人类在基因和DNA分子水平进行操作的技术。它包括以下几个步骤： 1）重组DNA分子的构建：即将目的基因（DNA或cDNA片段）与载体DNA重组，应用TA克隆方法将PCR扩增产物快速 ...

NCBI的“electronic PCR（e-PCR）”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的DNA片段中的STS标记物。UniSTS (http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/ ) 能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链接的其他NCBI资源如Entrez、LocusLink 和MapViewer 也同样提供 ...

分子杂交的概念及基本原理一、分子杂交的概念： 分子杂交（molecular hybridization）指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过退火处理，形成异质双链的过程。 利用这一原理，就可以使用已知序列的单链核酸片段作为探针，去查找各种不同来源的基因组DNA分子中的同源基因或同源序列。 二、分子杂交基本原理： （一）DNA变性 ： DNA变性是指 ...

EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质且不好处理.现提供如下方法供参考.特别是刚走进实验室未生育的新同行一定得学会保护自己呵否则还涉及到下一代问题 实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题，如何做到标准处理？1严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性，而且易挥发，挥发至空气中，危害很大。2废EB溶液的处理方法(1)对于EB含量大于0.5mg/ml的溶液，可如下处理： a.将EB ...

农杆菌介导ACC脱氨酶基因转化新疆哈密瓜的研究李晓荣1廖康2宫江平3赵长生4王惠41新疆农科院核生所，乌鲁木齐备8300002新疆农业大学园艺学院，乌鲁木齐备8300003新疆农科院园艺所，乌鲁木齐备8300004中国科学院新疆分院生态与地理研究所，乌鲁木齐备830000关键词：哈密瓜ACC脱氨酶基因乙烯新疆素有“瓜果之乡”的美 ...

・CaCl2感受态细胞的制备的实验步骤 1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜（约16小时）； 2．取 1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时（250-300rpm）； 3．将 0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷； 以下步骤需在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml ...

DNA以核蛋白形式存在于细胞核中，制备DNA的原则是既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。蛋白酶K及链霉蛋白酶E的应用使这两个原则得到了保证。 蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为广谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可破坏细咆膜、核膜，并使组织蛋白与 DNA分子分离，EDTA抑制细胞中DNase活 ...

细胞内的核酸多以核蛋白的形式存在，其中脱氧核糖核蛋白主要存在于细胞核中，核糖核蛋白主要存在于细胞质中。这两类核蛋白在0.14mol／L氯化钠溶液中的溶解度相差很大，核糖核蛋白在此溶液中具有很高的溶解度，脱氧核糖核蛋白的溶解度却相当低。制成肝匀浆后，用0.14mol／L氯化钠溶液抽提，可将两种核蛋白分离。分离过程中加入少量柠檬酸钠，可抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的水解作用。SDS(十二烷基硫酸 ...

EST电子延伸系统主要包括以下几个部分组成：预处理(pre-processing)、聚类(clustering)、拼接(assembly)和分析(analysis)。一、预处理Ø用crossmatch程序，去除载体序列（载体序列库：ftp://ncbi.nlm.nih.gov/repository/vector）。 处理时应注意的问题： 1、如果是用自已 ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印迹或称 ...

ESTs（Expressed Sequence tags）是从已建好的cDNA库中随机取出一个克隆，从5’末端或3’末端对插入的cDNA进行一轮单向自动测序，所获得的约60-500bp的一段cDNA序列。ESTs的产生：从特定的状态的组织或细胞中分离mRNA，将mRNA逆转录成cDNA亚克隆到载体中，利用载体上的引物对插入片段测序测序出来的片段结果即称为ESTs(expressed sequenc ...

来自加拿大多伦多大学，多伦多成瘾与心理卫生研究中心，以及瑞士，澳大利亚的研究者在最新一期的Nature Genetics发表研究成果，该研究文章在遗传学方面提出了新的问题，质疑DNA作为唯一遗传物质的学说。一直以来，经典的遗传学说认为DNA是遗传信息的载体，人类所有的信息都存在于这个小小的染色体上。从父母亲那遗传来的形状取决于DNA序列。文章作者Art Petronis教授否定了这一论断，他认为D ...

1．前夜接种受体菌（ DH5α或 DH10B），挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜； 2．取 2ml过夜培养物转接于200ml LB培养基中，在37℃摇床上剧烈振荡培养至OD600=0.6（约2.5-3小时）；3．将菌液迅速置于冰上。以下步骤务必在超净工作台和冰上操作 4．吸取 1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中，在冰上冷却10分钟； 5．4℃下3000g冷冻离心5分钟； 6．弃去 ...

影响因素： 1.肿瘤标志物具有特异性和非特异性的双重特点。 2.各种肿瘤特性的不同，如肿瘤的分期、大小、定位、组织来源及转移趋向等的不同。 3.各种抗体的不同，如多克隆抗体、单克隆抗体、抗体决定簇和抗体亲和性等的不同。 4.各种检测系统的不同，如检测原理、标记物、实验条件、检测技术、检测仪器和检测敏感度等的不同。 5.检验人员的专业水平和技术经验 ...

来自加州理工大学，NanoString Technologies公司，系统生物学研究院ISB，华盛顿大学以及英国伦敦学院等处的研究人员公布了一项新的研究成果：一种新型基因表达系统，这一系统原理基于彩色编码（color-coded，注）基因转录的数据检测，灵敏度比芯片更高（与实时PCR相近），能直接检测mRNA的表达水平，并且这一过程不需要酶学反应。这一研究成果公布在《Nature Biotechn ...

Promega Wizard SV Gel and PCR Clean-up System品牌：Promega回收范围：100bp-10kb价格：（50次杭州的试剂杭州报价为562元，11元/次） Promega的产品在进口品牌中一向以价格可亲而著称。这个胶回收试剂盒也不例外。并且这个试剂盒的性能参数好得令人刮目相看！首先是100bp�10kb的回收率高达80%�95%（用于PCR产物回 ...

MinElute Gel Extraction Kit 品牌：Qiagen回收范围：70bp-4kb价格：（50包装1485，约29元/反应）特点：洗涤体积只要10ul，回收产物浓度高，方便后继实验 使用方便快捷（wash-and-spin) 高回收率 回收产物纯度高，可用于同位素或荧光测序、芯片分析、连接转化、酶切、标记、PCR、显微注射、体外转录等后继实验使用心得： 如果要回收片断量本来 ...

20世纪70年代是一个奠定现代分子生物学的时代，1973年冷泉港实验室的Joseph Sambrook和Phillip Sharp发明了利用琼脂糖凝胶分离DNA和EB染料观测DNA相结合的技术。现在，琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是分离、鉴定和纯化核酸和蛋白质片断的标准方法。这里首先介绍的是琼脂糖凝胶电泳片断回收的常用方法： 1.柱回收试剂盒：可谓目前最简单快速的回收方法，只需要将电泳凝胶中的产物条带 ...

Chromatin Immunoprecipitation Protocols. ChIP assay. Protocols and Methods for chromatin IP.CHROMATIN IMMUNOPRECIPITATION (CHIP) PROTOCOL FOR YEAST PDF - http://research.stowers-institute.org/jeg/200 ...

一、 材料 　　基因组DNA(大于50kb分别来自不同的材料)。 　　二、设备 　　电泳仪及电泳槽， 照相用塑料盆5只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4块，吸水纸若干，尼龙膜(依胶大小而定)，滤纸 ，eppendorf管(0.5ml)若干。 　　三、试剂： 　　1、限制性内切酶(BamHⅠ EcoRⅠ HindⅢ XbaⅠ)及10×酶切缓冲液。 　　2、5×TBE电泳缓冲液：配方见第一章 ...